Презентация на тему "Аппарат гольджи"

Содержание

• 
  Слайд 1

  Аппарат гольджи

  Сердце секреторного пути

• 
  Слайд 2

  Движение грузов: модели

  Модель 1: везикулярный транспорт (разработана по клетках человека и животных) Модель 2: мембранный континуум (основана на данных ЭМ о соединениях ЭПР и АГ у растений) Модель 3: созревание цистерн (разработана на простейших) Брефельдин А – ингибитор секреции (блокирует формирование COP-комплекса)

• 
  Слайд 3

  Как выглядит АГ?

  ULLA NEUMANN et al. Ann Bot 2003;92:167-180 ©2003 by Oxford University Press Фотография АГ из корневого чехлика табака (а) – «вид в разрезе», и апикальной меристемы корня кукурузы (б) – «вид сверху». Транс-Гольджи 200 нм

• 
  Слайд 4

  Как расположен АГ?

  ULLA NEUMANN et al. Ann Bot 2003;92:167-180 ©2003 by Oxford University Press АГ (красн.) и ЭПР (зел) АГ(зел) и микрофидаменты (красн.)

• 
  Слайд 5

  Что держит цистерны вместе?

  Каждый АГ состоит из 5-8 цистерн. ribosome-exclusion zone – зона вокруг АГ, не содержащая рибосом (выявлена с помощью ЭМ) Считается, что эта зона заполнена неким матриксом, который обеспечивает скрепление цистерн. В этом процессе также участвуют интерцистернальные элементы. Так назвали плотные структуры между транс-цистернами.

• 
  Слайд 6

  Гольджины

  Белки матрикса, которые, естественно, были обнаружены сначала у животных. Детально их функции неизвестны, главная – структурная: связь между цистернами. Гомологи нескольких гольджинов обнаружены у растений Отсутствует та группа, которая у животных отвечает за распад АГ в митозе на отдельные цистерны Возможно, поэтому к растений АГ сохраняет целостность в процессе митоза.

• 
  Слайд 7

  ЭПР и АГ: работа в команде

  У растений есть существенные отличия в транспорте грузов между ЭПР и Гольджи: Они гораздо ближе друг к другу, между ними отсутствует посредник – ERGIC (ER–Golgi intermediate compartment) и микротрубочки, которые к нему ведут. ERES (ER exit sites) и Гольджи тесно ассоциированы друг с другом и находятся совсем рядом.

• 
  Слайд 8

  Животные и растения: почему так?

  У животных АГ находится неподалёку от ядра. ER exit sites (ERES) распределены по поверхности ЭПР и сконцентрир. около ядра – ближе к АГ. У растений АГ находятся по всей кортикальной цитоплазме и движутся вдоль ЭПР, тесно связанные с ERES. ERES – красн. ER – зел.

• 
  Слайд 9

  ЭПР и Гольджи: опять модели

  Fig. 3. ULLA NEUMANN et al. Ann Bot 2003;92:167-180 ©2003 by Oxford University Press Три модели взаимодействия ЭПР и Гольджи: Пылесос – Гольджижвиэется вдоль ЭПР, «собирая» груз. Экспорт происходит в любом месте. Стоп-пошёл: Гольджидвиэется, пока не получает сигнал остановиться и забрать груз Мобильные сайты экспорта: движутся и Гольджи, и сайты «выдачи груза» в составе ЭПР.

• 
  Слайд 10
  
• 
  Слайд 11

  Отцы и дети…

  Ряд авторов рассматривает АГ как «потомка» ЭПР. В принципе, это не влияет на изучение его строения и функций, однако включает в себя эволюционный и онтогенетический аспект. Эту гипотезу подтверждают работы, в которых нарушали формирование АГ, и тогда АГ-резиденты оставались в «отчем доме» – в ЭПР.

• 
  Слайд 12

  COP1 и COP2: на раз, два…

  Сoat protein complex II обеспечивает основной поток грузов - антероградный транспорт ЭПР – Гольджи. СОР1 обеспечивает ретроградный транспорт ЭПР-резидентов, имеющих сигнальную последоват. K/HDEL. В слиянии пузырьков принимают участие SNARE: vesicular (v-SNAREs) и target (t-SNAREs) Заякоривание происходит с помощью «тросов» (Tether)

• 
  Слайд 13

  Белки COP2 – молекулярные клетки

  Подвижная (гибкая) архитектура Формируют правильные многогранные «клетки»: 24-гранные и 60-гранные При определенных условиях могут становиться почти плоскими. Такая гибкость важна для формирования/ Рециклирования везикул Organization of the ER–Golgi interface for membrane traffic control Federica Brandizzi & Charles Barlowe Nature Reviews Molecular Cell Biology 14, 382-392 (June 2013)

• 
  Слайд 14
  
• 
  Слайд 15
  

  ULLA NEUMANN et al. Ann Bot 2003;92:167-180 ©2003 by Oxford University Press Иммунофлуоресценция использовалась для изучения локализации белков АГ: ARF1 (малая ГТФаза, компонент COP1-комплекса) COP1 VSR (маркёр превакуолярных органелл) Rab2 (малая ГТФаза)

• 
  Слайд 16

  Функции аппарата Гольджи

  «Дозревание» белков, предназначенных для секреторного пути (гликозилирование) Биосинтез полисахаридов клеточной стенки и ферментов, обеспечивающих её формирование Сортировка и упаковка грузов Дозревание липидов Рециклирование мембран: ПМ, ЭПР, вакуолярной системы. Золотом помечены ксилоглюканы (большое) и пектины (малое)

• 
  Слайд 17
  

  Chris Hawes, BéatriceSatiat-Jeunemaitre The plant Golgi apparatus—Going with the flow Biochimica et BiophysicaActa (BBA) - Molecular Cell Research, Volume 1744, Issue 2, 2005, 93–107

• 
  Слайд 18
  

  Гликансинтазы (CSL) – основная цепь CSL Гликозилтрансферазы

• 
  Слайд 19

  Гликозилтрансферазы

  Задача – манипуляции с углеводным компонентом: - N-гликозилированных пептидов - Будущих полимеров клеточной стенки Это трансмембранные белки с активным центром в люмене АГ. В одной и той же цистерне могут идти различные реакции. Ферменты организуются в комплексы за счет белок-белковых взаимодействий.

• 
  Слайд 20
  

  Ai Oikawa, Christian Have Lund, Yumiko Sakuragi, Henrik V. Scheller Golgi-localized enzyme complexes for plant cell wall biosynthesis FUT,a-1,3-fucosyltransferase; GALT1, b-1,2-galactosyltransferase; GnT, N-acetylglucosaminyltransferase; M an, a-1,2-mannosidase; XylT, b-1,2-xylosyltransferase. CSLC4, cellulose synthase-like C4; FUT1, xyloglucan a-1,2-fucosyltransferase 1; MUR3, xyloglucan b-1,2-galactosyltransferase; XLT2, xyloglucan position 2-specific b-1,2- galactosyltransferase XXT1, xyloglucan a-1,6-xylosyltransferase 1.

• 
  Слайд 21
  

  Маннозидаза I отщепление 4 молекул маннозы GlcNAc-трансфераза I присоединяет N-ацетилглюкозамин к одной из оставшихся молекул маннозы; Маннозидаза II отщепляет еще два маннозных остатка; Присоединение фукозы, ксилозы и второй молекулыацетилглюкозамина GlcNAc-трансферазой II

• 
  Слайд 22
  
• 
  Слайд 23

  Биосинтез полисахаридов КС: гликанов и пектиновых в-в

• 
  Слайд 24
  

  Гликозилтрансферазы могут иметь каталитическую часть на С-конце в люмене, трансмембранный домен (ТМД) и N-конец в цитозоле Другие белки имеют несколько ТМД. Между собой они взаимодействуют через цистеиновые остатки или нековалентные взаимодействия. Это помогает заякориваться некоторым ферментам, лишенных ТМД. Это помогает создавать мультифункциональные комплексы Это обеспечивает регуляцию активности ферментов Одни и те же ферменты могут входить в состав разных комплексов

• 
  Слайд 25

  Как изучать белок-белковые взаимодействия?

  Выделение и очистка коиммунопреципитация идентификация с помощью антител Электрофорез две половинки соединяются при взаимодействии передача энергии

• 
  Слайд 26

  Методы

  Как изучать направления и пути транспорта?

• 
  Слайд 27

  FM 4-64

  Этот флуоресцентный краситель липофилен, поэтому связывается с плазматической мембраной и проникает в клетку только путём эндоцитоза, а затем рециклирует, возвращаясь к ПМ. Таким образом, следя за движением метки, можно наблюдать «маршрут» везикулярного транспорта.

• 
  Слайд 28

  BFA-bodies: ингибиторный анализ

  Давным-давно для изучения секреции начали использовать Брефельдин А – «ингибитор секреции». Он останавливает транспортные процессы, приводя к образованию БФА-телец, или агрегатов. Изучение этих телец предоставляет массу информации о связи между органеллами эндомембранной системы. Например, тельца из АГ и ТГС лежат отдельно, и те белки, которые шли по пути эндоцитоза, остаются в ТГС, но не в АГ.

• 
  Слайд 29

  Брефельдин А

  Механизм действия этого ингибитора грибного происхождения на данный момент детально изучен: Он предотвращает активацию ГТФазы ARF1 за счет блокирования фактора обмена нуклеотидов (GEF). При этом практически все эндомембранные структуры оказываются в составе BFA-телец.

• 
  Слайд 30

  Пост-гольджи транспорт

  Секреторный путь. Эндоцитозный путь. Дополнительные органеллы.

• 
  Слайд 31

  Транс Гольджи Сеть

  Также носит название «ЕЕ» (earlyendosome) Движется независимо от АГ и лишь временно останавливается около одного из комплексов Участвует в рециклировании мембран Через TGN проходят белки как экспортные, так и идущие в вакуоль на деградацию.

• 
  Слайд 32
  

  Мобильная и независимая CorradoViotti et al. Plant Cell 2010;22:1344-1357 ©2010 by American Society of Plant Biologists ТГС движутся, отмечены события взаимодействия как с АГ, так и между собой (гомотипичная ассоциация) Отмечены случаи «диссоциации» Происхождение ТГС от АГ подтверждено ингибиторным анализом.

• 
  Слайд 33

  Откуда и куда?

  C помощью иммуноцитохимии было показано, что через ТГС проходят все белки секреторного пути Также через ТГС проходят все белки, попавшие в клетку путём эндоцитоза и направляющиеся на деградацию в превакуолярный компартмент.

• 
  Слайд 34

  Сложные пути эндосом

  ТГС принимает посылки от ПМ, посланные путём эндоцитоза Рециклирование мембранных белков происходит минимум 2-мя путями с помощью «рециклирующихэндосом». В ПВК попадают белки как из АГ (новые), так и из эндосомныхкомпартментов (старые). TrafficVolume 9, Issue 10, pages 1589-1598

• 
  Слайд 35

  ПреВакуолярный Компартмент

  ПВК получил свое второе название МВТ – мультивезикулярное тело - благодаря своей способности образовывать «внутренние везикулы» (с помощью ESCRT). Они содержат белки ПМ, подлежащие деградации. После слияния с вакуолью эти везикулы постепенно разрушаются. Ретромерный комплекс служит для выявления и рециклирования служебных белков - рецепторов вакуолярных грузов. Они возвращаются в ТГС.

• 
  Слайд 36

  ПВК удалось «увидеть»

  Аппараты Гольджи + ТГС DV – densevesicles – несут запасные белки в вакуоль CCV – clathrin-coatedvesicles – выполняют все остальные перемещения MVB – превакуолярный компартмент Ниже – ПВК, содержащие агрегаты запасных белков и внутренние везикулы. ПВК образуются при слиянии везикул АГ, содержащих запасные белки (DV) и протеазы (CCV). TrafficVolume 9, Issue 10, pages 1589-1598, 9 JUL 2008 DOI: 10.1111/j.1600-0854.2008.00787.xhttp://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1600-0854.2008.00787.x/full#f4

• 
  Слайд 37

  Значение эндоцитоза

  Эндоцитоз и эндосомы играют ключевую роль в дифференциации зародыша, гравитропизм, дифференциация эпидермиса, устьичные движения, защита от патогена и др. Особенность растительных клеток в разнообразии транспортных путей и вакуолей. Это разнообразие ведёт к увеличению количества белков, участвующих в процессах, и к их многофункциональности. Конститутивное рециклирование – постоянный трафик между эндосомой и ПМ, поддерживающий состав белков ПМ. Идуцибельноерециклирование– в ответ на сигнал, например, гормональный, - позволяет быстро изменять состав белков ПМ.

• 
  Слайд 38

  Примеры рециклирования

  Наиболее изученный пример рециклирования у растений – белки транспорта ауксина PIN1 и AUX1. Это конститутивное рециклирование, причём эти 2 белка задействуют 2 разных пути: BFA-чувствительный и BFA-нечувствительный. Пример индуцибельногорециклирования – закрытие устьиц, при котором эндоцитоз белка К+-канала активируется абсцизовой кислотой.

• 
  Слайд 39

  На деградацию!

  Сортировка белков ПМ в эндоцитозные везикулы и далее во внутренние везикулы ПВК – важный этап отрицательной регуляции рецепторов, вовлеченных в физиологические процессы. Инвагинации в эндосоме – особый случай образования везикул, поскольку во всех остальных случаях везикулы формируются в цитоплазме. Для образования инвагинации нужно проставление метки – убиквитинирование белка-рецептора.

• 
  Слайд 40

  Как образуются «внутренние везикулы»?

  Образование везикул обеспечивает endosomal sorting complex required for transport (ESCRT). TrafficVolume 9, Issue 10, pages 1589-1598

• 
  Слайд 41
  

  Меченый убиквитином рецептор попадает в эндосому и инициирует сборку клатриновой шубы. В этом участвует комплекс ESCRT и АТФазаVps4p/SKD1, которая в АТФ-связанной форме прикреплена к мембране, а в АДФ-связанной – растворима.

• 
  Слайд 42

  Эндосомы и сигналинг

  Эндоцитоз не только помогает убирать с поверхности активированные рецепторы Он также может доставлять эти рецепторы к тому месту, где сигнал будет передан и усилен. Пример: FLS2 (flagellinsensing) – киназа, которая активируется в ответ на заражение, и инициирует вторичный ответ после эндоцитоза. BRI1 также находится и работает в 2 местах

• 
  Слайд 43
  

  NikoGeldner, and SilkeRobatzek Plant Physiol. 2008;147:1565-1574 ©2008 by American Society of Plant Biologists Эндосомы и сигналинг Модель эндоцитоза BRI1 и FLS2 с участием корецептора BAK1. После ранней эндосомы их пути разделяются.

• 
  Слайд 44

  Происхождения эндосомногосигналинга

  «Столпотворение»? рецепторам не хватает места на поверхности клетки; эндоцитоз создаёт дополнительные «посадочные места». «Активное перемешивание»? Рецепторы находятся далеко от ядра, и трансдукция сигнала зависит от диффузии; эндоцитозпревносит активную компоненту («доставка сигнала»).

• 
  Слайд 45

  Вакуоли: 2 или 1

  Известно 2 основных типа вакуолей: LV (литическая) и PSV (белок-запасающая). Их локализацию изучали с помощью GFP-слитых аквапоринов-маркёровα-TIP (PSV)иγ-TIP (LV) или антител к ним. Белки, которые направляются в литическую вакуоль, имеют сигнальную последовательность ssVSSs, которая взаимодействует с рецептором семейства вакуолярныхсортеров(VSR). Белки, предназначенные для хранения, имеют другой сигнал (ctVSSs), который связывается с другим рецептором(RMR).

• 
  Слайд 46

  Иногда их чётко 2

  Алейрон в литической вакуоли Лектин ячменя в запасающей вакуоли α-TIP (PSV) – красные, TIP-МА27(LV) - зеленые

• 
  Слайд 47

  А иногда всего 1…

  Например, центральная вакуоль в корнях, листьях и зародыше Арабидопсиса содержит оба маркёра. Предполагают, что разные типы вакуолей чаще всего содержатся либо в разных типах клеток, либо в конце концов сливаются, формируя центральную вакуоль

• 
  Слайд 48

  Итак, зачем нужны вакуоли?

  поддержание тургора гомеостатирование цитоплазмы запасание продуктов метаболизма изолирование ксенобиотиков разложение компонентов цитоплазмы защита от патогенов и травоядных пигментация