Содержание
-
Кафедра медицинской биологии, микробиологии, вирусологии и иммунологии ГЕНЕТИКА БАКТЕРИЙ И ВИРУСОВ. ОСНОВЫ БИОТЕХНОЛОГИИ И ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ. Лектор ас. Е.В. Покрышко
-
План лекции
Строение генетического аппарата клетки. Внехромосомные элементы наследственности. Мутации. Рекомбинации. Основы генной инженерии. Генетика вирусов.
-
История развития молекулярной биотехнологии
-
-
F. Crick i J. Watson
-
-
Генетический материал бактерий представлен: хромосомой (одна, замкнутая в кольцо) внехромосомными элементами наследственности: плазмидами транспозонами IS-элементами
-
Плазмидынеобязательные компоненты микробных клеток, могут иметь линейную или кольцевую структуру, и неспособны к самостоя-тельной репликации.
Транспозоны – мигрирующие элементы, имеют гены для переноса внутри клеток и одновременно содержат гены резистентности к антибиотикам, ионам тяжелых металов. IS-элементы – мигрирующие гены, которые способны на перенос внутри клеток и с одного участка ДНК на другой; е - плазмиды - обязательный компонент микробных клеток, в состав которых входит ДНК и РНК.
-
Транспозон и IS элемент
Транспозон содержит структурные гены иповторяющиеся участки
-
Функции IS-элементов
1.Координирующая: взаимодействие транспозонов, плазмид, умеренных фагов между собой и хромосомой бактерии, обеспечивая их репликацию. 2. Регуляторная: вызывают инактива-цию генов, или служат промоторами (участки ДНК, которые регулируют экспрессию клеточных генов). 3. Индуцируют мутации по типу делеции или инверсии
-
Функции транспозонов
1. Регуляторная. 2. Кодирующая. 3. Индуцируют мутации. 4. Вызывают хромосомные аберрации.
-
Классификация плазмид
По размещению в клетке: внехромосомные интегрироованные По типу передачи: конъюгативные (трансмиссивные, имеют tra-ген) неконъюгативные По признакам,что обуславливают определённые свойства микроорганизмов
-
Види плазмід
Сol – продукция колицинов HLy – продукция гемолизинов Tol – расщепление толлуола, ксилола Ent– продукция энтеротоксина Nif – связывание азота у K. pneumoniae Ti – образование опухолей у растений Плазмиды деградации: Саm – расщепление камфоры Oct - расщепление октана Sal - расщепление салицина Виды плазмид
-
Функциональные свойства плазмид
Антибиотико- резистентность пенициллин Гибель клетки пенициллин Пролиферация антибиотико- резистентных штаммов R-плазмида Фертильность Реципиент F-плазмида F-пили Донор Вирулентность Нетоксигенный штамм Плазмида вирулентности Токсин Метаболизм
-
Види плазмід
1. Регуляторная 2. Кодирующая. Функции плазмид
-
По происхождению: спонтанные индуцированные По локализации: нуклеоидные цитоплазматические По количеству генов, которые мутировали: генные хромосомные По величине: большие (хромосомные) малые (точковые) Мутации
-
Види плазмід
Инверсия Дупликация Делеция Дислокация Хромосомные мутации :
-
делеция инсерция (вставка) замена: транзиция (пуриновая основа – на пуриновую, пиримидиновая – на пиримидиновую) трансверзия (пуриновая основа – на пиримидиновую и наоборот) Точковые мутации :
-
Мутагенные факторы
Физические: 1. УФО (λ-2600 А) – наиболее сильное мутагенное действие; образуются димеры тимина, смена основ 2. Ионизирующее излучение (рентгеновское, гамма-лучи)
-
Химические: 1.Азотистая кислота 2.N-нитрозометилмочевина – супермутаген, канцероген 3. Этилметансульфонат 4. Акридины 5. Нитрозогуанидин 6. Аналоги основ (5-бромурацил, 2-аминопурин) 7. Лекарственные препараты (нитрофураны, некоторые антибиотики
-
Биологические: перекись водорода антибиотики бактериофаги
-
Действие разных мутагенов на бактерии
Различные физические и химические факторы повышают частоту мутаций. Ультрафиолетовое излучение и диоксин являются мутагенами и вызывают образование мутантов (коасные клетки)
-
R-и S-формы колоний
-
Свойства микробов S-колоний
Клетки нормальной морфологии Диффузное помутнение бульона У подвижных видов есть жгутики У капсульных вариантов есть капсулы Биохимически более активны Полноценны в антигенном отношении У патогенных видов – вирулентны Выделяют в остром периоде заболевания Чувствительны к бактериофагам Менее чувствительны к фагоцитозу
-
Методы выявления мутантов
По разнице скорости роста (посев на минимальную среду) Различная способность к выживанию Метод реплик Ледерберга
-
Метод реплик
Полноценная среда Минимальная среда для обнаружения ауксотрофов
-
Световая репарация-рассоединение тиминовых димеров ферментами в присутствии света
-
Темновая репарация
1. деградация прилегающих к поврежденному участку ДНК 2. вырезание при помощи рестриктаз поврежденных участков, 3. востановление удаленного участка при помощи фермента ДНК зависимой ДНК полимеразы 4. сшивание ДНК- лигазами
-
SOS-реактивация
При множественных повреждениях участки с мутациями переводятся в неактивное состояние, а их роль выполняет неповрежденный участок ДНК
-
Трансформация(опытыГриффитса, 1928; Евери Мк Леода и Макарти, 1944)
-
ТРАНСФОРМАЦИЯ
-
ТРАНСДУКЦИЯ (Циндер и Ледерберг, 1952)
Виды: общая (генерализированная) специфическая абортивная Вызывают умеренные, дефектные фаги
-
ТРАНСДУКЦИЯ
-
Специализированная трансдукция
-
ОТЛИЧИЯ ТРАНСДУКЦИИ и ФАГОВОЙ КОНВЕРСИИ
Трансдукция – перенос генетической информации из клетки в клетку при помощи фага Фаговая конверсия - экспрeссия в клетке генов бактериофага (Corynebacterium diphtheriae, Clostridium botulinum, Staphylococcus spp., Salmonella spp.)
-
КОНЪЮГАЦИЯ – (Ледерберг и Тейтум, 1946)
-
-
рекомбинациии Трансдукция Конъюгация Трансформация
-
Трансдукция – передача генетического материала от донора реципиенту при помощи бактериофага . Трансформация – передача генетического материала от донора реципиенту при помощи изолированной ДНК. Конъюгация - это передача генетического материала от бактерии-донора к бактерии-реципиенту путем непосредственного контакта.
-
Молеку- лярная биология Микро- биология Биохимия Химическая инженерия Генетика Клеточная биология Молекулярная биотехнология Высоко- урожайные культуры Лекарст- венные пре- параты Вакцины Диагно- стические методы Высо- копродуктив- ные сельскохо- зяйственные животные
-
ПРОДУЦЕНТЫ, которые чаще всего используются в биотехнологии
ЭУКАРИОТЫ – дрожжи, плесневые грибы, культуры клеток животных, людей и растений ПРОКАРИОТЫ – кишечная палочка, аэробные бациллы, псевдомонады, актиномицеты.
-
Хромосомная карта E. coli
-
Биотехнологические продукты микроорганизмов - продуцентов
сами клетки как источник продукта крупные молекулы (ферменты, токсины, антигены, антитела, пептидогликаны и др.) низкомолекулярные метаболиты, необходимые для роста клеток (аминокислоты, витамины, нуклеотиды, органические кислоты). антибиотики, алкалоиди, токсины, гормоны
-
СФЕРЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОТЕХНОЛОГИИ
-
Основные продукты, которые получают при помощи биотехнологии
-
Некоторые гормоны человека, продуцируемые рекомбинантнимы микроорганизмами
-
Генная инженерия–
направленное изменение генома продуцента в нужном для человека направлении: пересадка в геном продуцента генов других организмов (человека, животного, растения), кодирующих синтез необходимого человеку продукта.
-
“ИНСТРУМЕНТЫ" ДЛЯ ГЕННОЙ ИНЖЕНЕРИИ
ФЕРМЕНТЫ (рестриктазы, лигазы, обратная транскриптаза) ВЕКТОРЫ (плазмиды, умеренные бактериофаги, космиды, транспозоны, вирусы)
-
СХЕМА ГЕННО - ИНЖЕНЕРНОГО ЭКСПЕРИМЕНТА
определение локализации необходимого гена (сиквенс, генетическая карта) - клонирование (выделение) необходимого гена при помощи рестриктакз взможно выдиление иРНК и комплементарный синтез необходимого гена при помощи обратной транскриптазы соединение изолированного гена с геномом вектора при помощи ферментов (рестриктаз, лигаз) введение рекомбинантного вектора в клетку-продуцент
-
БИОТ Е ХНОЛОГИЯ
-
БИОТЕХНОЛОГИЯ
-
ГЕНОТЕРАПИЯ
-
ГЕНЕТИКА ВИРУСОВ
Способы увеличения информации: двухразовое считивание одной иРНК с других инициирующих кодонов сдвиг рамки трансляции сплайсинг (вырезание интронов) транскрипция с участков ДНК, что перекрываются
-
У вирусов могут быть:
Модификации(изменение состава белков капсида, суперкапсида под влиянием клеток) Мутации (размер бляшек под агаровым покрытием, нейровирулентность для животных, чувствительность к действию химиотерапевтических агентов, ts-мутации – температурочувствительные – вирус теряет способность размножаться при повышенной температуре Рекомбинации
-
ВИДЫ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕКОМБИНАЦИЙ У ВИРУСОВ
1. РЕКОМБИНАЦИИ: междугенная – обмен генами внутригенная – обмен частями генов
-
2. Множественная реактивация:вирусная инфекция вызывается путём заражения вирионами с поовреждённым геномом, так как функцию этого гена выполняет вирус, у которого ген не повреждён. Потомство – неповреждённые вирусы. 3. Пересортировка генов: между вирусами, имеющими сегментированные геномы (вирусы гриппа человека, уток, свиней, буньявирусы, аренавирусы, реовирусы). Гибридные формы називают реасортанты.
-
ВИДЫ РЕКОМБИНАЦИЙ У ВИРУСОВ
4. Гетерозиготность:одновременной репродукции нескольких вирионов, разных по наследственным свойствам, образуются вирионы, которые содержат геном одного из родитеских штаммов и часть генома другого вируса (диплоидные или полиплоидные вирусы). Такое объединение не наследуется, но разрешает дать потомство с разными свойствами. Это вирусы гриппа, болезни Ньюкасл.
-
5. Транскапсидація:частЬ чужеродного генетического материла, заключённого всередину капсида другого вируса, способна переноситься в стабильной форме в чувствительные к основному вирусу клетки. Аденовирусы человека не размножаются в клетках обезьян. Но при одновременном культивировании аденовирусов и вирусов SV-40 под одним капсидом оьразуется вирус, содержащий геномы обоих вирусов, способный размножаться в клетках обезьян.
-
6. Кросс-реактивация (спасение маркера): реактивацияинактивированного генома неинактивированным.
-
ВИДЫ НЕГЕНЕТИЧЕСКОГО ВЗАЄМОДЕЙСТВИЯ ВИРУСОВ
1. Фенотипическое смешивание 2. Негенетическая реактивация 3. Комплементация 4. Стимуляция 5. Интерференция
Нет комментариев для данной презентации
Помогите другим пользователям — будьте первым, кто поделится своим мнением об этой презентации.