Содержание
-
Активный транспорт ионов
Поскольку ПП мембраны нейронов не является равновесным потенциалом для каждого отдельного типа ионов, разные ионные токи постоянно текут через мембрану по своим концентрационным градиентам. Эти токи текут через потенциал-зависимые и другие ионные каналы и значительно увеличиваются во время генерации нервных импульсов и синаптических потенциалов.
-
Ионные токи, протекающие через отдельные каналы
Открытие и закрытие ионных каналов отражаются в виде прямоугольных токовых сигналов.
-
Потенциал-зависимые и другие ионные каналы
Каналы, образующие водную пору, включают потенциал-зависимые: K+-, Ca2+- и Na+-селективные каналы К+-каналы внутреннего выпрямления потенциал-независимые: К+-каналы с двумя водными порами каналы, состояние которых зависит от связывания с различными внутриклеточными лигандами: АТФ-активируемые К+-каналы, Са2+ или Nа+ (Са2+(Nа+)-зависимые КСа(Na)-каналы) Са2+-каналы, активируемые комплексом Са2+-калмодулин цАМФ (цГМФ)-зависимые неселективные катионные каналы К+-каналы, активируемые с участием G-белков внеклеточными лигандами: ионотропные рецепторы
-
Зачем нужны системы активного транспорта?
-
Для поддержания нормального функционального состояния нейронов в их мембранах локализованы транспортные системы, восстанавливающие ионные градиенты по обе стороны мембраны путем переноса различных ионов против их концентрационных градиентов. Кроме транспорта ионов в нейронах, как и в других клетках организма, имеются транспортные системы, переносящие через мембраны (в т.ч. и через мембраны клеточных органелл) различные метаболиты – аминокислоты, сахара, нейромедиаторы и проч.
-
Два механизма активного транспорта
Известны два механизма активного транспорта: системы первичного активного транспорта(ионные насосы) с использованием энергии гидролиза АТФ системы вторичного активного транспорта (ионные обменники), работающие за счет энергии электрохимических градиентов некоторых ионов (например, Na+и K+), накопленной в результате работы первичного активного транспорта.
-
Механизмы первичного активного транспорта
Системы первичного активного транспорта используют энергию гидролиза АТФ. В настоящее время известно четыре типа АТФаз P-, V-, F- и ATP-binding cassette–типа), выполняющих разнообразные функции в клетках организмов. В нервных клетках механизм первичного активного транспорта обеспечивает транспорт ионов через мембрану против их пассивного потока по электрохимическому градиенту, поддерживая тем самым трансмембранную разность потенциалов, определяющую ПП.
-
Натрий-калиевый насос
В начале 1950-х г.г., исследуя действие локальных анестетиков на ионную проводимость нерва краба, Йенс Скоу (Jens Christian Skou) установил, что фермент АТФаза, встроенный в клеточную мембрану, наиболее эффективно активируется при действии определенной комбинации концентраций ионов Na+, K+ и Mg2+. Используя метод измерения теплопродукции, Й. Скоу также показал при, что нерв краба в состоянии покоя утилизирует энергию АТФ, что косвенно свидетельствовало о протекании реакции окислительного фосфорилирования с участием АТФазы. ?!Й. Скоу лишь высказал неопределенное предположение, что этот фермент каким-то образом связан с транспортом ионов через мембрану и не выдвинул АТФазу на роль непосредственного переносчика ионов.
-
Позже Р. Кейнс (Richard Keynes) с соавторами, используя радиоактивный 24Na+, впервые непосредственно измерил энергозависимый выход этого иона из аксоплазмы толстого аксона каракатицыSepia. После длительной стимуляции аксона, погруженного в раствор с радиоактивным 24Na+, измеряли выход этого иона из аксона. При действии блокатора реакции окислительного фосфорилирования (с участием фермента АТФазы) динитрофенола (ДНФ) выход 24Na+ резко снижался. После того, как препарат отмывали от блокатора, выход 24Na+ возобновлялся.
-
После длительной стимуляции аксона, погруженного в раствор с радиоактивным 24Na+, измеряли выход этого иона из аксона. При действии блокатора реакции окислительного фосфорилирования (с участием фермента АТФазы) динитрофенола выход 24Na+ резко снижался. После того, как препарат отмывали от блокатора, выход 24Na+ возобновлялся. Выход 24Na+ также снижался при удалении внешнего К+
-
Затем в экспериментах с использованием радиоактивного К+, было показано, что выходящий Na+-поток ассоциирован с одновременным АТФ-зависимым входом К+ внутрь аксона. Все эти эксперименты окончательно доказали, что фермент АТФаза в мембране аксона выполняет роль энергозависимого Na+/К+-насоса.
-
Принцип работы Na+/K+-насоса (Na+/К+-АТФазы)
Переносчик (Na+/K+-насос) выводит из клетки три иона Na+ и вводит в нее два иона К+, т.е. является электрогенным, удаляя из клетки суммарный положительный заряд и тем самым дополнительно (к механизму поддержания ПП) гиперполяризуя мембрану на несколько мВ. На внутренней стороне мембраны переносчик расщепляет АТФ, связывается с остатком фосфата и тремя ионами Na+ и переносит их наружу. На внешней стороне мембраны переносчик теряет остаток фосфата, связывается с двумя ионами К+ и переносит их внутрь клетки.
-
На внутренней стороне мембраны переносчик расщепляет АТФ, связывается с остатком фосфата и тремя ионами Na+ и переносит их наружу. На внешней стороне мембраны переносчик теряет остаток фосфата, связывается с двумя ионами К+ и переносит их внутрь клетки. внутри клетки снаружи
-
Принцип работы Na+/K+-насоса (Na+/К+-АТФазы) На внутренней стороне мембраны переносчик расщепляет АТФ, связывается с остатком фосфата и тремя ионами Na+ и переносит их наружу. На внешней стороне мембраны переносчик теряет остаток фосфата, связывается с двумя ионами К+ и переносит их внутрь клетки.
-
Электрогенность Na+/K+-насоса (В) При инъекции Na+Na+/K+-насос выводит из клетки три иона Na+ и вводит в нее два иона К+, что приводит к гиперполяризации мембраны. Инъекция Li+не сопровождается гиперполяризацией.
-
Электрогенность Na+/K+-насоса (С) При действии уабаина (ouabain) гиперполяризация существенно ослабляется.
-
Электрогенность Na+/K+-насоса (D) Удаление К+ блокирует насос, и гиперполяризации не наблюдается до тех пор, пока уровень К+ не восстанавливается.
-
Молекулярная структура Na+/K+-АТФазы
Na+/К+-АТФаза относится к группе P-АТФаз (от Phosphorylation), у которых специальный регуляторный участок (остаток аспарагиновой кислоты) активируется в результате его обратимого фосфорилирования при отщеплении фосфата от АТФ.
-
Молекулярная структура Na+/K+-АТФазы
-
-
Молекулярная структура Na+/K+-АТФазы
Na+/К+-АТФаза состоит из двух субъединиц - - (с молекулярной массой около 100 кД) и - (с массой около 35 кД), образующих тетрамер ()2 . Идентифицировано 3 изоформы - и 2 изоформы - субъединицы
-
включает несколько мест связывания с субстратом: участок фосфорилирования, участок связывания АТФ, участок связывания одновалентных катионов, участок связывания уабаина.
-
Са2+-насос (Са2+-АТФаза)
является АТФазой P-типа, выводящей Са2+ из цитоплазмы. Эта АТФаза (наряду с Na+/Ca2+-обменником) выполняют главную функцию по поддержанию низкого уровня внутриклеточного Са2+, необходимого для обеспечения внутриклеточных путей сигнализации. Существуют две разновидности Са2+-АТФаз Са2+-АТФазы плазматической мембраны при фосфорилировании переносят один ион Са2+ во внеклеточное пространство.
-
Существуют две разновидности Са2+-АТФаз Са2+-АТФазыэндоплазматического (в нейронах) и саркоплазматического (в мышечных клетках) ретикулумов, а также митохондрий при фосфорилировании переносят два иона Са2+ из цитоплазмы (саркоплазмы) в перечисленные внутриклеточные мембранные структуры. SERCA - Sarco/Endoplasmic Reticulum Ca2+-ATPase
-
Са2+-АТФазыэндоплазматического (в нейронах) и саркоплазматического (в мышечных клетках) ретикулумов, а также митохондрий при фосфорилировании переносят два иона Са2+ из цитоплазмы (саркоплазмы) в перечисленные внутриклеточные мембранные структуры. The calcium binding site is in a tunnel formed by four alpha helices,which cross straight through the membrane. This illustration, fromPDB entry 1eul, shows a view down the helices. The two calciumions, shown as blue-green spheres, are held by a collection ofamino acids, shown in balls-and-sticks, that coordinate it from allsides. The protein is far less stable when these calcium ions areremoved. It was solved by adding a drug molecule that binds nearthe calcium-binding site and freezes the protein into a stable, butnon functioning, form.
-
Существуют две разновидности Са2+-АТФаз ! Еще одно отличие. Са2+-АТФаза плазматической мембраны регулируется внутриклеточным комплексом Са2+/калмодулин (Са2+-активируемый белок), который связывается со специальным участком на внутриклеточной петле насоса. Такая регуляция обеспечивает быструю активацию Са2+-АТФазы плазмалеммы при увеличении внутриклеточной концентрации Са2+.
-
Обе формы Са2+-АТФазы (плазматическая и «органельная») представлены одиночной полипептидной цепочкой с молекулярной массой около 100 кД, которая сходна по своей структуре с -субъединицей Na+/К+-АТФазы. Системы первичного активного транспорта Са2+ являются высокоаффинными (высокая степень связывания катиона), но относительно медленными по сравнению с системой вторичного активного транспорта этого катиона.
-
Протонный насос
В мембранах клеточных органелл (лизосом, эндосом, а также синаптических везикул) протонный насос Н+-АТФаза V-типа (от англ., Vacuolar) с использованием энергии гидролиза АТФ переносит внутрь органелл Н+, поддерживая в них низкий уровень PH. Протонный градиент, направленный из синаптических везикул в цитоплазму, используется для транспорта молекул медиаторов внутрь везикул.
-
Кроме того в мембранах митохондрий содержится Н+-АТФаза F-типа, работающая в «обратном» направлении: этот фермент синтезирует АТФ из АДФ и остатка фосфата при движении протонов по концентрационному градиенту из матрикса митохондрий в цитоплазму.
-
АТФазы в других клетках
Магниевый насос В мембранах эритроцитов выделена Mg2+-АТФаза P-типа, которая с использованием энергии АТФ выводит наружу ионы Mg2+. Протон-калиевый насос В мембранах эпителиальных клеток желудка выделена H+/К+-АТФаза P-типа. По своей структуре она сходна с Na+/К+-АТФазой. В отличие от последней эта АТФаза не является электрогенной, поскольку выводит один ион H+ наружу и один ион К+- внутрь клетки, не нарушая при этом баланс зарядов по обе стороны мембраны.
-
АТФаза F-типа в плазматической мембране бактерий является аналогом Н+-АТФазы F-типа, которая в мембранах митохондрий синтезирует АТФ из АДФ и остатка фосфата с использованием энергии протонного градиента. В отличие от Н+-АТФазы митохондрий АТФаза мембран бактерий использует энергию градиента Na+, направленного внутрь клетки и по сути является Na+-АТФазой F-типа.
-
Хлорный насос Хлорная АТФаза, переносящая ионы Cl- из цитоплазмы во внеклеточное пространство, является представителем группы разнообразных АТФаз четвертого типа, называемых в англоязычной литературе ATP-binding cassette transporters (переносчики с АТФ-связывающей кассетой). Кроме транспорта Cl- эти насосы выполняют разнообразные функции: обеспечивают проницаемость гликопротеинов через мембраны; 2) выводят из клеток токсические метаболиты, обеспечивая тем самым, например, устойчивость раковых клеток при химиотерапии; 3)запускают иммунный ответ клеток против чужеродных белков, осуществляя антиген-пептидный транспорт из цитозоля в эндоплазматический ретикулум. Хлорные АТФазы обнаружены в культуре клеток мозга, что указывает на возможность существования первичных механизмов транспорта хлора. Однако до настоящего времени такие транспортные системы пока еще не найдены в нервной ткани.
-
Транспорт других катионов
Среди группы P-АТФаз также известны насосы, переносящие через мембраны клеток другие катионы: Ag+ и Ag2+, Zn2+, Co2+, Pb2+, Ni2+, Cd2+, Cu+ и Cu2+.
-
Механизмы вторичного активного транспорта
Переносят некоторые ионы и низкомолекулярные соединения (например, медиаторы) против их концентрационных градиентов, используют энергию электрохимических градиентов других ионов (например, K+ и Na+), аккумулированную в результате работы первичного активного транспорта. Подразделяют нако-транспортеры и ионные обменники: Ко-транспортеры обеспечивают перенос одних ионов против их концентрационного градиента в том же направлении, в котором движутся другие ионы по своим концентрационным градиентам. Обменники обеспечивают перенос одних ионов против их концентрационного градиента за счет движения других ионов (по их концентрационному градиенту) в противоположном направлении. Такой механизм вторичного активного транспорта называют также антипортом (antiport).
-
Ко-транспортеры и ионные обменники
Ко-транспортеры(cotransporter) обеспечивают перенос одних ионов против их концентрационного градиента в том же направлении, в котором движутся другие ионы по своим концентрационным градиентам. Обменники (exchanger) обеспечивают перенос одних ионов против их концентрационного градиента за счет движения других ионов (по их концентрационному градиенту) в противоположном направлении.
-
Ко-транспортеры(cotransporter) обеспечивают перенос одних ионов против их концентрационного градиента в том же направлении, в котором движутся другие ионы по своим концентрационным градиентам.
-
Обменники (exchanger) обеспечивают перенос одних ионов против их концентрационного градиента за счет движения других ионов (по их концентрационному градиенту) в противоположном направлении.
-
Регуляция внутриклеточной концентрации Са2+
Na+/Ca2+-обменник при значительной деполяризации может работать в противоположном направлении 1 Ca2+ 3 Na+ 3 Na+ 1 Ca2+
-
Na+/Ca2+-K+-обменникв мембранах фоторецепторов сетчатки Благодаря дополнительной энергии градиента для К+Na+/Ca2+-К+-обменник может поддерживать в фоторецепторах очень низкий уровень концентрации внутриклеточного Са2+ (около 1 нМ) в условиях низкого уровня ПП (-40 мВ). Обычный Na+/Ca2+-обменник в условиях такого низкого уровня ПП способен снизить уровень Са2+ только до уровня около 400 нМ. 1 Ca2+ 4 Na+ 1 K+ 1 Ca2+ 3 Na+
-
Система вторичного активного транспорта Са2+ является низкоаффинной (низкая степень связывания катиона), но относительно быстрой по сравнению с системой первичного активного транспорта этого катиона. Эффективность этого обменника примерно в 50 раз выше, чем у Са2+-АТФазы из-за более высокой плотности этих молекул в мембране. Na+/Ca2+-обменник играет важную роль в условиях массированного входа в клетку, вызванного повышенной электрической активностью, когда активности Са2+-АТФазы недостаточно для регуляции концентрации внутриклеточного Са2+. С другой стороны Са2+-АТФазы активны в условиях низких (меньше 1 мкМ) концентраций внутриклеточного Ca2+, что обеспечивает тонкую регуляцию концентрации Са2+.
-
Регуляция внутриклеточной концентрации Сl-
К+/Cl--ко-транспортная система выводит Cl- из клетки за счет градиента ионов К+ и не зависит от внеклеточной концентрации Na+. Эта транспортная система необходима для восстановления нормальной внутриклеточной концентрации Cl- в результате постсинаптической гиперполяризации. 1 Cl- 1 K+
-
Высокая концентрация внутриклеточного Cl- при развитии нейронов поддерживается благодаря работе одной из двух изоформ Na+/К+/2Cl--ко-транспорта, переносящего внутрь клетки два иона Cl- и один ион К+ за счет градиента ионов Na+, направленного внутрь. 2 Cl- Na+ 1 K+
-
Регуляция внутриклеточного уровня pH
Электрическая активность нейронов и внутриклеточный pH находятся в реципрокных отношениях: увеличение электрической активности вызывает быстрые изменения pH и, наоборот, флуктуации pH влияют на выделение медиаторов из нейронов и на частотуих импульсации. Механизмы регуляции внутриклеточного уровня pH в нейронах и глиальных клетках принципиально сходны с таковыми в других клетках и обеспечиваются главным образом четырьмя различными системами вторичного активного транспорта.
-
1) Внутриклеточный уровень pН поддерживается благодаря Na+/Н+-обменнику, транспортирующего через мембрану один ион Na+ в цитоплазму (по концентрационному градиенту) один ион Н+ из цитоплазмы. 1 H+ 1 Na+
-
2) Внутриклеточный уровень pН поддерживается Na+-зависимым Cl-/HCO3- -обменником, который выводит ионы Cl- и Н+ наружу, а ионы Na+ и HCO3- - внутрь клетки. Таким образом, кроме вклада в регуляцию рН этот обменник также поддерживает низкую концентрацию Cl- в цитоплазме. Cl- Na+ H+ HCO3-
-
Ион HCO3- выполняет в клетке роль буфера протонов. 3) HCO3- транспортируется посредством Na+/HCO3--ко-транспорта за счет градиента Na+ 4) и Na+-независимым Cl−/HCO3--обменником за счет градиента Cl− Na+ HCO3- Cl- HCO3-
-
Транспорт медиаторов из внеклеточного пространства в цитоплазму
Транспорт медиаторов через мембраны нейронов и глиальных клеток, а также через мембраны клеточных органелл обеспечивается специальными системами вторичного активного транспорта. Транспортеры медиаторов характеризуются высокой аффинностью и способностью быстро переносить молекулы медиаторов. Они представляют собой белки, состоящие из 500-800 аминокислот, и локализованы в пре- и постсинаптических мембранах нейронов, а также в мембранах глиальных клеток – астроцитов.
-
Транспортеры медиаторов подразделяются на два семейства (см. табл.): 1) Na+/Cl--зависимые (А) 2) и Na+/K+-зависимые (Б)
-
Транспортерымедиаторовплазматическихмембран
-
Транспорт медиаторов из внеклеточного пространства в цитоплазму
Схематичная структурная организация медиаторных транспортеров А - схематичная топология Na+/Cl--зависимых транспортеров, отражающая 12 трансмембранных доменов, соединяющих внутри- и внеклеточные петли. У-образные фрагменты на большой внеклеточной петле между 3-м и 4-м доменами предположительно представляют собой N-гликозилированные остатки аспарагиновой кислоты. (по Masson J, Sagne C, Hamon M, Mestikawy SEL (1999) Neurotransmitter transporters in the central nervous system. Pharmacol Rev 51:439–464).
-
Схематичная структурная организация медиаторных транспортеров Б - схематичная топология Na+/К+-зависимыхглутаматных транспортеров, отражающая 8 трансмембранных доменов, входящую извне шпилькообразную петлю (A и B), которая напоминает ионпроводящую пору ионного канала, фрагмент С соединяет домен 8 с остальной частью молекулы (по Masson J, Sagne C, Hamon M, Mestikawy SEL (1999) Neurotransmitter transporters in the central nervous system. Pharmacol Rev 51:439–464).
-
Транспорт медиаторов из цитоплазмы в везикулы
Транспорт медиаторов в секреторные везикулы обеспечивается специальными системами вторичного активного транспорта – везикулярными транспортерами медиаторов, которые представляют собой белки, состоящие из 500-600 аминокислот. Транспорт большинства медиаторов из цитоплазмы внутрь везикул осуществляется с использованием градиента протонов, направленного из везикулы в цитоплазму. В свою очередь электрохимический градиент протонов формируется в результате работы Н+-АТФазы V-типа. Этот градиент включает химический (концентрационный градиент) и электрический (разность потенциалов) компоненты. В зависимости от транспортера оба или только один из этих компонентов могут использоваться в качестве источника энергии для транспорта медиатора.
-
Везикулярныетранспортерымедиаторов
Везикулярные транспортеры медиаторов включают три семейства (см. табл.), переносящие 1) ГАМК и глицин, 2) амины, включая ацетилхолин 3) и L-глутамат.
-
-
-
Транспортеры (B) ГАМК и глицина и (A) аминов (включая ацетилхолин) являются обменниками и переносят медиаторы внутрь везикул за счет энергии электрохимического градиента протонов, выходящих в цитоплазму, включающей 1) энергию концентрационного градиента протонов (H+antiport), и 2) энергию мембранного потенциала (между содержимым везикулы и цитоплазмой) (Δψdriven uniport).
-
В отличие от транспортеров двух первых семейств переносчики третьего семейства используют только электрический компонент протонного градиента (Δψdriven uniport) - разность потенциалов между содержимым везикулы и цитоплазмой. При этом не отмечается сопряженный выход протонов из везикулы в цитоплазму. !!! На рис. ошибочно указан выход протонов
-
Транспортеры могут выступать в роли ионных каналов, а ионные каналы могут выступать в роли транспортеров
!? Часть молекулы транспортера может функционировать как ионный канал и, наоборот, ионный канал может проявлять активность транспортера Transporters as Channels (2007) Louis J DeFelice and TapasreeGoswami. Annu Rev Physiol 69:87–112.
-
Транспортеры могут выступать в роли ионных каналов
Обнаружен токсин, который предположительно блокирует Na+/K+-АТФазу, превращая ее в ионный канал, проводящий ионы Na+ и K+. Некоторые транспортеры демонстрируют канал-подобные свойства, обуславливающие короткие электрические события, сопоставимые с дискретными событиями в обычных ионных каналах. Например, показано, что молекула глутаматных транспортеров группы EAAC включает ионный канал, проницаемый для Cl−, а дофаминовый транспортер демонстрирует ионные токи, также специфичные для Cl−.
-
а ионные каналы могут выступать в роли транспортеров
С другой стороны, известны примеры, когда белки, представляющие собой ионные каналы, демонстрируют свойства транспортеров. Например, один из группы Cl--каналов может выполнять функцию Cl-/H+-обменника.
Нет комментариев для данной презентации
Помогите другим пользователям — будьте первым, кто поделится своим мнением об этой презентации.