Презентация на тему "Векторы на основе бактериофага"

Содержание

• 
  Слайд 1

  Векторы на основе бактериофага

• 
  Слайд 2

  Литический цикл развития

  Схема размножения фага

• 
  Слайд 3
  

  Молекулярные аспекты ЛИТИЧЕСКогоПУТи РАЗВИТИЯ БАКТЕРИОФАГА – сборка внутри клетки новых фагов

• 
  Слайд 4

  cos-Сайт

  После того, как фаговая ДНК попадает в клетку кишечной палочки, липкие концы соединяются и образуется кольцевая молекула, подобная плазмиде, которая способна реплицироваться автономно за счет эксплуатации ферментов и нуклеотидов клетки-хозяина. Схема строения фаговой ДНК сos-Сайт

• 
  Слайд 5
  

  50 т.п.н. 50 т.п.н 50 т.п.н 50 т.п.н

• 
  Слайд 6
  

  Использование фага в качестве вектора.Получение рекДНК на основе нуклеиновой кислоты фага

• 
  Слайд 7

  Генетическая карта фага- λ

  черный участок - сегмент I/E (integration/excision) соответствует генам, несущественным для размножения фага, отв. за встраивание в ДНК клетки-хозяина(т.е. за путь лизогении) = 20 т.п.н. сегмент I/E integration/excision Bam HI 20 т.п.н.

• 
  Слайд 8

  Э В Р И К А !!!

  идея: заменить часть фаговой ДНК, которая несущественна для размножения фага (I/E)фрагментом донорной ДНК, кодирующей синтез полезных БАВ. Условие: донорная ДНК должна иметь размер, эквивалентный размеру исключенного участка ДНК, т.е. 20 тпн.

• 
  Слайд 9
  

  Технология рекомбинации ДНК с применением вектора на основе бактериофага λ

  I/E лизогения лизис

• 
  Слайд 10

  На практике:

  к суспензии подготовленных бактерий добавляется ДНК фага осуществляется посев суспензии на чашку Петри с плотной питательной средой на основе агара. Инкубация Клетки, несодержащие ДНК фага, размножаются на агаре и дают мутный "газон", заполняющий всю поверхность чашки. В тех точках, куда попали бактерии с ДНК фага, остаются прозрачные просветы - бляшки (негативные колонии). Образование бляшек связано с тем, что ДНК фага реплицируется в клетке и дает зрелые фаговые частицы. Затем фаговые частицы попадают в среду, заражают окружающие клетки и разрушают их. В результате каждая бляшка состоит из потомков фагов, содержащих одну и ту же ДНК - копию ДНК, попавшей в клетку. Негативные колонии, образованные «рекомбинантными» фагами, идентифицируют и выделяют с помощью методов иммунологического скрининга, радиоавтографии и др. (см. ниже)

• 
  Слайд 11

  Космидные векторы - плазмиды, имеющие cos-концы

• 
  Слайд 12

  Технология рекомбинации ДНК с применением космидного вектора

  Идентифицируют клетки, воспринявшие рекДНК, по устойчивости к тетрациклину