Содержание
-
Санитарно-микробиологическоеисследование аптек.
-
МИКРОФЛОРА ГОТОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ
Под лекарственной формой понимают одно или несколько лекарственных веществ, подвергшихся специальной обработке, в результате которой им придана удобная для применения больным форма. В аптеках изготовляют следующие лекарственные формы: сухие (порошки, сборы), жидкие (микстуры, настои, отвары, капли), мягкие (мази, пасты, шарики, свечи) и стерильные инъекционные препараты
-
Лекарства с повышенной обсемененностью микробами, особенно патогенными, могут вызывать инфекционные заболевания у людей, кроме того, размножение микроорганизмов в лекарственных средствах ведет к изменению их физических и органолептических свойств, а в отдельных случаях и к превращению лекарств в токсический продукт. Срезанные и сорванные при заготовке лекарственные растения (растительное сырье) могут содержать большое количество микробов.
-
Растительное сырье может быть загрязнено: 1) нормальной микрофлорой растений; 2) фитопатогенной микрофлорой; т.е. микробами самих растений 3) микробами из окружающей среды. Растительное лекарственное сырье может загрязняться микроорганизмами из окружающей среды на всех этапах его заготовки и хранения: сбор, первичная обработка, сушка, измельчение, упаковка, получение резаного сырья, растительных порошков, а также при приготовлении брикетов, гранул, таблеток.
-
Срезанные и сорванные растения являются хорошей питательной средой для размножения микроорганизмов (грибов, гнилостных и целлюлозоразрушающихбактерий и др.). Поэтому происходит микробная порча сырья. Признаки порчи: изменение цвета, появление очагов размножения плесени и пр. Микробная порча приводит к изменению фармакологических свойств растений и лекарственных препаратов, полученных из растений, а также может служить причиной образования токсичных продуктов. Патогенные микроорганизмы могут вызывать заболевания у людей, использующих препараты.
-
-
Одним из способов, препятствующих росту микроорганизмов на растениях, является их высушивание. На высушенных растениях жизнедеятельность микробов значительно снижается, многие бактерии погибают. В связи с этим, микробная порча сырья происходит в первую очередь при повышенной влажности, которая способствует размножению гнилостных микробов. Поэтому необходимо строго соблюдать условия хранения растительного сырья и проводить бактериологический контроль его микробной загрязненности.Микробная обсемененность лекарственных препаратов зависит от соблюдения в аптеке санитарно-гигиенического режима.
-
Микрофлора готовых лекарственных форм
изготовляемых в аптеках и на производстве, зависит от : 1)вида сырья, его питательной ценности для микроорганизмов или, напротив, его антимикробной активности, начальной загрязненности; 2) химической природы веществ, входящих в состав лекарственного средства; 3) технологии приготовления (настои, отвары, температура, время, объем и пр.);
-
4) условий хранения; 5) санитарно-гигиенических условий в аптеках и на фабриках. Инъекционные препараты, глазные капли и мази, препараты для новорожденных должны быть стерильными. В ряде случаев инъекционные средства, оставаясь стерильными, обладают пирогенными свойствами. Пирогенная реакция организма человека, возникающая за счет убитых бактерий и продуктов их распада, содержащихся в лекарственном препарате, характеризуется повышением температуры, вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях – шоковым состоянием.
-
Пирогенные вещества (пирогены), представляющие собой эндотоксины (преимущественно грамотрицательных бактерий), проходят через бактериальные фильтры, не инактивируются при кипячении, для их разрушения необходимо автоклавирование в течение 3 ч. Причиной пирогенности лекарственных препаратов, являются загрязнение дистиллированной воды, нарушение асептики технологического процесса, увеличение времени (более 1,5 ч) между приготовлением раствора и началом стерилизации.
-
Из инъекционных жидких лекарственных форм легче всего обсеменяются микробами настои и отвары; при их хранении появляются признаки порчи: муть, изменение цвета, пленка, необычный запах. Срок хранения этих препаратов ограничен. Спиртовые настойки меньше подвержены порче вследствие антимикробного действия алкоголя. Сухие порошкообразные средства, особенно тальк и крахмал, мягкие лекарственные формы также подвержены микробному загрязнению. Их микробная порча носит очаговый характер и состоит в изменении цвета и консистенции вещества.
-
Микробный состав готовых лекарств представлен следующими группами: 1. плесневые грибы - Penicillium, Aspergillus, Mucor; 2. дрожжевые грибы; 3. кокки - сарцины, стафилококки; 4. спороносные палочки - B. subtillis, B. mesentericus. Предупреждениемикробной порчи готовых лекарственных веществ возможно при соблюдении условий, исключающих их микробное загрязнение: соблюдение правил личной гигиены фармацевтами, качественное обеззараживание воздуха аптечных помещений, правильная обработка посуды, оборудования.
-
САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В АПТЕКАХ
В аптеках работниками государственного санитарно-эпидемиологического надзора согласно инструкции, утвержденной приказом Министерства здравоохранения, не менее двух раз в квартал осуществляется бактериологический контроль, объектами которого служат: 1) вода дистиллированная; 2) инъекционные растворы до стерилизации; 3) инъекционные растворы после стерилизации;
-
4) глазные мази после стерилизации; 5) глазные капли, приготовленные в асептических условиях на стерильной основе; 6) сухие лекарственные вещества, используемые для приготовления инъекционных растворов; 7) нестерильные лекарственные формы; 8) аптечная посуда, пробки, прокладки, прочие материалы; 9) инвентарь, оборудование, руки, санитарная одежда персонала; 10) воздух аптечных помещений.
-
Микроорганизмы, попадающие в лекарства, приводят к их порче и могут изменить их качество, разлагая своими ферментами действующее начало и переводя его в другие соединения. Таким образом, микроорганизмы могут изменять свойства лекарств, делая их неактивными или даже токсичными, например, в результате образования микробных токсинов и пирогенов. Они могу вызывать инфекционные заболевания у людей, использующих препараты, загрязненные микроорганизмами родов Staphylococcus, Pseudomonas, Salmonella и др..
-
Среди готовых лекарственных форм наиболее загрязненными являются препараты растительного происхождения – настои и отвары При хранении этих лекарств, особенно в теплом месте, количество микробов в них возрастает до высоких цифр, и появляются признаки порчи. Признаками микробной порчи жидких лекарственных форм является помутнение, если лекарственная форма должна быть прозрачной, появление осадка, увеличивающегося в объеме, образование пленки на поверхности, появление запаха, несвойственного данной лекарственной форме.
-
В связи с этим осуществляется бактериологический контроль соблюдения санитарно-гигиенического режима изготовления лекарственных препаратов на предприятиях и в аптеках и проводится санитарно-микробиологический контроль каждой сериивыпускаемой лекарственной формы, т.е. проводится определение микробной загрязненности различных готовых лекарственных препаратов.
-
МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ МИКРОБНОЙ ЧИСТОТЫ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ.
Определение микрофлоры в лекарственных формах: Определение микрофлоры в лекарственных формах состоит из следующих этапов: 1. определение общего микробного числа (микробная обсемененность); 2. определение бактерий группы кишечной палочки; 3. определение дрожжевых и плесневых грибов; 4. определение условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (по специальным показателям).
-
Определение микробной обсемененности растительного лекарственного сырья: 1) В асептических условиях (в стерильной чашке Петри, обоженными ножницами и пинцетом) из листа или верхнего слоя корневища вырезают кусочек площадью 1 см2, который помещают в пробирку с 10 мл стерильного физиологического раствора и взбалтывают в течение 5 мин. 2)Из полученного смыва готовят четыре десятикратных разведения (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000), для посева используют два последних разведения в связи с большой обсемененностью растительного сырья.
-
3)В стерильную чашку Петри вносят 1 мл смыва, после чего в нее наливают 15 мл расплавленного и остуженного до 450С МПА, перемешивают и после застывания агара посевы инкубируют при 370С 24-48 ч. 4)Производят подсчет выросших колоний на поверхности и в глубине агара. Полученное число колоний следует умножать на степень разведения.
-
Для оценки микробной обсемененности растительного сырья используется метод смывов: 1) В асептичных условиях, используя стерильные инструменты, взвешивают 1 г сырья, помещают в стерильную пробирку с 5 мл изотонического раствора хлорида натрия и встряхивают на шуттель-аппарате в течение 10 мин; 2) берут 1 мл смыва, делают разведения 1:10, 1:100; из каждого разведения делают посев в глубину питательной среды в чашках Петри. 3) подсчитывают число выросших колоний и, зная разведение смыва, подсчитывают микробную загрязненность сырья.
-
Микробную загрязненность лекарственного сырья выражают количеством клеток микроорганизмов в 1 г (мл) сырья. Для выявления роста грибов и дрожжей используют среду Сабуро или сусло-агар, для выявления бактерий – МПА. При этом засевают 2-3 параллельные чашки на каждое разведение. Оставляют в термостате при 37°С и при 24°.
-
Источники микробного загрязнения лекарственных препаратов:1) лекарственные растения; 2) вода 3) аптечная посуда, оборудование и пр.; 4) воздух производственных помещений; 5) руки персонала. Микроорганизмы могут попадать в лекарственные средства в процессе неправильного анализа, особенно органолептического.
-
Лекарственные средства для парентерального введения в виде инъекций, глазные капли, мази, пленки, средства для новорожденных, должны быть стерильными. Стерильные инъекционные растворы могут обладать пирогенными свойствами, т.е. вызывать повышение температуры тела. Это обусловлено наличием в них убитых бактерий или продуктов их распада.
-
Пирогены– это сложные по своей структуре вещества, которые содержат протеины, липиды и полисахариды, и вызывают в макроорганизме комплекс изменений, характеризующихся повышением температуры тела, вазомоторными расстройствами, в тяжелых случаях – шоковым состоянием. Пирогенами являются бактериальные эндотоксины. Все растворы, предназначенные для инъекций не должны содержать пирогенов. Но освободить от них готовый продукт не удается, т.к. пирогены проходят через бактериальные фильтры и устойчивы к нагреванию.
-
Для этого необходимо соблюдать специальные требования при изготовлении стерильных лекарственных средств: 1) дистиллированная вода уже до стерилизации не должна содержать кишечной палочки; 2) общее количество микробов в воде не должно превышать 10 – 15 клеток на 1 мл;3) препараты готовят в асептических условиях, пользуются стерильной посудой, соблюдают стерильность при их упаковке, после приготовления стерилизуют.
-
Проверку стерильности производят в боксах со строгим соблюдением правил асептики. Делают посев на тиогликолевую среду (для выявления различных бактерий, в том числе анаэробов) и посев на среду Сабуро (для выявления грибов, г.о. рода Кандида). Если нет роста микробов на средах, то препарат является стерильным.Если лекарственное средство обладает антимикробным действием, то стерильностьопределяют путем мембранной фильтрации.
-
После фильтрации исследуемого препарата фильтр делят на части и вносят для роста задержанных микроорганизмов в жидкие питательные среды. При отсутствии роста препарат считается стерильны Лекарственные средства, не требующие стерилизации, содержат микроорганизмы. Но их содержание не должно превышать предельно допустимых значений для различных лекарственных форм.
-
Оценка микробной загрязненности нестерильных препаратов.Определяют:1) количество жизнеспособных бактерий в 1 г или 1 мл препарата;2) количество жизнеспособных грибов в 1 г или 1 мл препарата; 3) кишечную палочку и представителей семейства энтеробактерий, синегнойную палочку и золотистого стафилококка, которые не должны присутствовать в нестерильных лекарственных средствах.
-
Методы определение микробной загрязненности лекарственных средств, не обладающих антимикробным действием.
От каждой серии препарата отбирают 10 проб из 10 разных упаковок, в целом не меньше 50 г или мл. На анализ берут 30 г т(мл), разделив на 3 части по 10 г (мл). Определение общего количества бактерий и грибов. 1) 10 г (мл) разводят в 10 раз 0,1 М раствором фосфатного буфера, доводя конечный объем до 100 мл.
-
2) Делают посев по 1 мл разведенного препарата двухслойным агаровым методом в 2 чашки Петри с МПА, содержащим 0,1% глюкозы для определения бактерий и по 1 мл в 2 чашки Петри со средой Сабуро с антибиотиками для грибов. 3) Затем подсчитывают число колоний, находят среднее арифметическое для 2-х чашек и высчитывают количество бактерий и грибов в 1г (мл) отобранного на анализ образца.°С 5 дней, а со средой Сабуро для определения грибов при 24°ашки с МПА для определения бактерий инкубируют при 37
-
Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae. 1)Из каждой пробирки с чистой культурой делают пересевы на :24 – 48 час. На среде Эндо бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют малиновые колонии с металлическим блеском. На висмут-сульфитном агаре– черные или зеленовато-бурые, светло-зеленые или коричневые колонии. 2) Колонии исследуют микроскопически и выявляют грам «-» неспоровые палочки. 3) Подозрительные колонии пересевают на скошенный в пробирках МПА с 0,1% глюкозой и инкубируют при 37°С 24 – 48 час. При наличии роста делают пересев на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. 4) Инкубируют при 37°Следующие 10 г(мл) образца вносят в 90 мл среды обогащения, перемешивают и инкубируют при 37 С.1
-
1) среду с глюкозой и феноловым красным ( энтеробактерии ферментируют глюкозу и среда становится желтой); 2) среду с нитратом калия (энтеробактерии восстанавливают нитраты в нитриты и не имеют фермента цитохромоксидазы). Если в образце обнаружены грам «-» неспоровые палочки, которые дают отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментируют глюкозу и восстанавливают нитраты в нитриты, то делают вывод, что исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae.
-
Определение бактерий S. aureus и P. aeruginosa. Стафилококк на солевом агаре образует желтые колонии, окруженные желтыми зонами. При микроскопии обнаруживаются грам"+" кокки. С чистой культурой стафилококка ставят реакцию плазмокоагуляции. Для этого: 1)в пробирку с 0,5 мл разведенной (1:4) плазмой крови человека или кролика вводят петлю агаровой культуры стафилококка и инкубируют 1-24 час при 37°С 24 – 48 час.
-
2)При наличии роста делают пересев петлей на чашки Петри с солевым агаром с маннитом для стафилококка и на чашки Петри со средой для идентификации синегной палочки. 3)Инкубируют при 37°Следующие 10 г(мл) образца вносят в 90 мл накопительной среды и инкубируют при 37 С.P. aeruginosaна диагностической среде образует зеленые флюоресцирующие колонии. Их идентифицируют микроскопически и биохимически. Под микроскопом бнаруживаютграм «-» палочки. Реакция на цитохромоксидазу положительна (бумажка с индикатором синеет).
-
Нормативы. В нестерильных лекарственных средствах для приема внутрь в 1 г (мл) должно быть не более 1000 бактерий и 100 дрожжевых и плесневых грибов, а также должны отсутствовать патогенные и условно-патогенные микроорганизмы - представители семейства энтеробактерий, синегнойная палочка и золотистый стафилококк.Лекарственные средства для местного применения (полость уха, носа, интравагинально) не должны содержать более 100 (суммарно) микробных клеток в 1 г (мл).В таблетированных препаратах не должно быть патогенной микрофлоры, а общая обсемененность не должна превышать 10 тыс. микробных клеток на 1 таблетку.
-
Бактериологическое исследование стерильных лекарственных средств
Инъекционные растворы, глазные капли, лекарственные средства для новорожденных, а также другие лекарственные препараты, стерилизуемые в процессе их изготовления, засевают неразведенными в тиогликолевую среду для определения микробной обсемененности и среду Сабуро для выявления дрожжевых и плесневых грибов. Посевы на тиогликолевой среде выдерживают 14 сут при 370С, на среде Сабуро 14 сут при 240С. Учет результатов посевов проводят по отсутствию видимых изменений в посевах.
-
Определение микробной обсемененности готовых лекарств 1) Жидкие лекарственные формы разводят стерильным физиологическим раствором 1:10 (или 1:100) и засевают в объеме 0,5 мл на МПА в чашке Петри. 2) 1 г порошка или таблеток помещают в пробирку с 10 мл физиологического раствора и после растворения производят посев на МПА.
-
3)Мягкие лекарственные формы (мази, пасты) в количестве 1 г взвешивают в асептических условиях, переносят в пробирки с 10 мл стерильного 1,4% раствора натрия гидрокарбоната для диспергирования, которое производят вращательным движением пробирки между ладонями в течение 2-4 мин. 0,5 мл полученного раствора засевают на МПА в чашках Петри. Чашки с посевами помещают в термостат на 48 ч, затем подсчитывают число бактериальных колоний и определяют количество бактерий в 1 мл или 1 г образца.
-
Определение общего количества грибов Определение общего количества грибов проводят на твердой среде Сабуро, на которую засевают 0,5 мл цельного или разведенного 1:10 препарата. Посевы инкубируют при 240С в течение 5 сут, затем подсчитывают число выросших колоний и определяют количество грибов в 1 мл или 1 г препарата.
-
Качественное определение условно-патогенных и патогенных микроорганизмов 1. Определение бактерий семейства Enterobacteriaceae (роды Escherichia, Salmonella, Shigella). Посев лекарственных средств производят на среду Эндо и висмут-сульфитный агар. Идентификацию энтеробактерий осуществляют следующим образом: если в образце обнаружены грамотрицательные неспоровые палочки, дающие отрицательную реакцию на цитохромоксидазу, ферментирующие глюкозу и восстанавливающие нитраты в нитриты, исследуемый препарат содержит бактерии семейства Enterobacteriaceae
-
2. Определение патогенных стафилококков. Определение патогенных стафилококков производят посевом препарата на желточно-солевой агар. На этой среде патогенные стафилококки вызывают лицитовителлазную реакцию, проявляющуюся в образовании вокруг колоний зоны помутнения с радужным венчиком по периферии. Выделенную чистую культуру исследуют на наличие фермента плазмокоагулазы.
-
3. Выявление Pseudomonas aeruginosa. Осуществляют на среде с глицерином. Синегнойная палочка на этой среде образует зеленоватые флуоресцирующие колонии, выделяющие в среду сине-зеленый пигмент. 4. Выявление протея. Производят посевом на МПА по Шукевичу. Наличие условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в лекарственных препаратах недопустимо.
-
Нормативы предельно допустимого содержаниянепатогенных микроорганизмов в лекарственных формах (содержание микроорганизмовв 1 г/мл).
-
Бактериологическое исследование в аптеках
С целью проверки качества мытья посуды, санитарного состояния аптек, соблюдения правил личной гигиены персоналом проводят санитарно-бактериологическое исследование аптечной посуды, оборудования, рабочих столов, полотенец, санитарной одежды и рук аптечных работников. Для определения микробной загрязненности используют метод смывов с поверхности исследуемых объектов стерильным физиологическим раствором.
-
Приготовление смывов. Для исследования используют 3 флакона. В один из флаконов наливают 10 мл стерильного физиологического раствора, ополаскивают внутреннюю поверхность сосуда, переливают во второй и третий флаконы, последовательно ополаскивая их. Пробки (корковые, полиэтиленовые, резиновые) в количестве 5 штук стерильным пинцетом помещают в широкогорлую стерильную колбу, закрытую ватно-марлевой пробкой, заливают 10 мл стерильного физиологического раствора и тщательно прополаскивают.
-
Воронки, пробирки, пипетки ополаскивают 10 мл стерильного физиологического раствора. Смыв со стола производят с поверхности 100 см2, для чего используют специальные трафареты из проволоки или жести, стерилизуемые прокаливанием перед взятием смывов. Смыв осуществляется стерильным ватным тампоном, помещенным в пробирку с 2 мл стерильного физиологического раствора. Непосредственно перед взятием смыва тампон смачивают физиологическим раствором, тщательно протирают поверхность стола ограниченную трафаретом, помещают в пробирку, в которую добавляют 8 мл стерильного физиологического раствора и тщательно тампон прополаскивают.
-
Смывы с рук берут влажным тампоном (тампон находится в пробирке с 2 мл стерильного физиологического раствора), протирая ладони, подногтевые, межпальцевые пространства обеих рук. Тампон помещают в пробирку, добавляют 8 мл стерильного физиологического раствора и тщательно его прополаскивают. Смывы исследуют на общее бактериальное загрязнение (ОМЧ), на наличие кишечной палочки и золотистого стафилококка; обнаружение которых свидетельствует о грубых нарушениях санитарного режима в аптеках.
-
Определение микробного числа. 1 мл смыва вносят в стерильную чашку Петри, заливают 12-15 мл расплавленного и остуженного до 450С МПА, тщательно перемешивают содержимое чашки и после застывания агара ее помещают в термостат на 24-48 час. Подсчитывают количество выросших колоний, умножают на 10 и определяют общую микробную обсемененность объекта.
-
Определение бактерий кишечной палочки как показателя фекального загрязнения. Остаток смывной жидкости (около 8 мл) засевают в пробирку, содержащую 1 мл концентрированной среды Эйкмана. Посев инкубируют при 430С 24 ч. При наличии газообразования в среде производят высев на дифференциально-диагностическую среду Эндо в случае появления типичных темно-красных колоний производят микроскопию и ставят оксидазную пробу.
-
Критерии оценки микробной обсемененности аптечной посуды, рабочих столов, рук персонала.
При исследовании микробной загрязненности посуды, оборудования, рук аптечных работников количество мезофильных аэробов и факультативных анаэробов не должно превышать 150 в 10 мл смывной жидкости. При бактериологическом исследовании в аптеках наличие бактерий группы кишечной палочки и золотистых стафилококков не допускается.
-
Количество микробов в 1 м3 воздуха.
-
-
Список используемой литературы
Учебник по микробиологии и вирусологии, 2003г. авт. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.Б. Медицинская микробиология авт. Покровский В.И., Позднев О.Г. 2001г. Санитарная микробиология авт. Лабинская А.С. 2008г.
Нет комментариев для данной презентации
Помогите другим пользователям — будьте первым, кто поделится своим мнением об этой презентации.