Презентация на тему "Серологические реакции"

Содержание

• 
  Слайд 1

  СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

  СПбГУ 2013г.

• 
  Слайд 2

  Сложности диагностики

  получение ложноотрицательного результата : неправильное взятие материала, несвоевременная доставки его в лабораторию, несовершенная методика бактериологического исследования угнетение жизнеспособности или гибели возбудителя под действием проводимого лечения (если материал берется не в первые дни заболевания, а уже на фоне этиотропной терапии)

• 
  Слайд 3
  

  получение ложноположительного результата : контаминация материала бактериооносительство выделение условно-патогенных микроорганизмов

• 
  Слайд 4
  

  Выделенный микроорганизм является возбудителем, если: подтверждена триада Коха многократность обнаружения данных видов, массивность роста бактерий в высевах на плотные питательные среды, антигенная и фаговаровая однородность выделяемых субкультур диагностического нарастания титров гомологичных антител при серологических исследованиях.

• 
  Слайд 5

  Микробиологические методыдиагностики делятся на:

  методы прямого обнаружения возбудителя в организме больного — бактериоскопическое и бактериологическое исследования; методы косвенного доказательства наличия возбудителя в организме больного —иммунологические исследования, направленные на обнаружение специфических антигенов в инфицированном материале или антител в сыворотке крови и различных секретах организма больного.

• 
  Слайд 6

  Бактериоскопическое исследование

• 
  Слайд 7

  Бактериологический метод

• 
  Слайд 8
  

  ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ, СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ (лат. serum сыворотка + logos учение) – методы изучения определенных антител в сыворотке крови больных, выявления антигенов микроорганизмов или тканей с целью их идентификации, основанные на реакциях иммунитета.

• 
  Слайд 9

  Строение антител (Ig)

• 
  Слайд 10
  
• 
  Слайд 11

  Строение и классы иммуноглобулинов

• 
  Слайд 12
  

  В основе иммунологических реакций лежит специфическое взаимодействие антигена с антителом.

• 
  Слайд 13

  ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ТЕСТ-СИСТЕМЫ

  При определении антигена - минимальная концентрация вещества, определяемая данной тест-системой. При определении антител – процент образцов, давших положительный результат в данной тест-системе, от общего количества обследованных образцов, содержащих выявляемые антитела.

• 
  Слайд 14

  СПЕЦИФИЧНОСТЬ ТЕСТ-СИСТЕМЫ

  Процент образцов, давших отрицательный результат в данной тест-системе, от общего количества обследованных образцов, действительно не содержащих выявляемый маркёр.

• 
  Слайд 15

  ППЗ и ОПЗ

  Положительное прогнозируемое значение(ППЗ) – вероятность того, что пациент с положительным результатом анализа действительно болен (инфицирован). Отрицательное прогнозируемое значение (ОПЗ) – вероятность того, что пациент с отрицательным результатом анализа действительно здоров (не инфицирован).

• 
  Слайд 16

  ЗАВИСИМОСТЬ ППЗ И ОПЗ ОТ РАСПРОСТРАНЁННОСТИ ЗАБОЛЕВАНИЯ

• 
  Слайд 17

  Сыворотка крови

• 
  Слайд 18

  Пробирки - контейнеры для получения сыворотки крови

• 
  Слайд 19

  Варианты иммунологических реакций:

  Прямые, основаны на взаимодействии антигена с антителом (агглютинация, преципитация) Опосредованные реакции или непрямые, взаимодействие атнигена и антитела через посредника (реакция непрямой гемагглютинации, реакция связывания комплемента) Реакции с использованием меченых антител или антигенов (иммуноферментный, радиоиммунный анализ, метод флюоресцирующих антител).

• 
  Слайд 20

  Реакция агглютинации, варианты:

  Ориентировочная РА Развернутая РА Реакция Кастеллани РНГА РЛА Реакция Кумбса Ко-агглютинации

• 
  Слайд 21
  

  Реакция агглютинации (ориентировочная, для идентификации микроорганизма)

  1 2 Отсутствие агглютинации 2. Наличие агглютинации Физ. р-р + культура микроорганизмов Сыворотка (1:100) + культура микроорганизмов Возможна спонтанная агглютинация – R-формы бактерий

• 
  Слайд 22

  Развернутая реакция агглютинации

  КSV Кдиагностикум +++ +++ ++ + -

• 
  Слайд 23

  А. Кастеллани

  метод Кастеллани (A. Castellani, р. 1878 г., итал. врач) — метод извлечения противобактериальных антител из иммунной сыворотки крови путем их сорбции на убитых бактериях соответствующего штамма (удаление АТ, реагирующих с групповыми АГ); применяется для изучения антигенных свойств бактерий, главным образом кишечной группы, а также для изготовления моноспецифических сывороток.

• 
  Слайд 24

  Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

  Метод обнаружения и идентификации антигенов или антител, основанный на возникающем в их присутствии феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых были предварительно адсорбированы соответствующие специфические антитела или антигены. Отличается большей чувствительностью и специфичностью. 1. АГ (АТ) +эритроциты нагруженные эритроциты 2. Нагруженные эритроциты + иммунная сыворотка или АГ Положительная Реакция (зонтик) Отрицательная Реакция (пуговка)

• 
  Слайд 25
  

  Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) – или пассивная гемагглютинация (РПГА)

  Эр Эр Эр Эр Эр Эр Аг Аг Аг Аг Аг Аг Аг Аг Аг Аг Аг Аг Аг + + Ат Ат Ат Эритроцитарный диагностикум Ат Ат Аг Аг зонтик Сыворотка

• 
  Слайд 26

  РНГА в иммунологическом планшетена выявление HBsAg.

• 
  Слайд 27

  Постановка и результат РНГА.

  Условные обозначения: - нет гемагглютинации (пуговка) ; - есть гемагглютинация (зонтик).

• 
  Слайд 28

  Тест-система для проведения РНГА

  Эритроцитарный диагностикум Нормальная сыворотка

• 
  Слайд 29

  Реакция торможения гемагглютинации(РТГА)

  метод идентификации вирусов или выявления противовирусных антител в сыворотке крови больного. в присутствии иммунной к вирусу сыворотки крови агглютинация эритроцитов отсутствует

• 
  Слайд 30

  Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) (схема).

• 
  Слайд 31
  
• 
  Слайд 32

  Результаты РТГА при типировании вируса гриппа

  Условные обозначения: - торможение гемагглютинации (пуговка) ; - гемагглютинация (зонтик). Исследуемый материал содержит вирус гриппа тип А с антигеном H3N2 Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации.

• 
  Слайд 33

  Определение титра антител крови больного по РТГА

  Титр антител определяют по последней лунке с положительной РТГА. титр антител равен 1:40.

• 
  Слайд 34

  Реакция латекс-агглютинации (РЛА)

  Частицы латекса (искусственные эритроциты) используют в качестве носителя АГ. Ревматоидный фактор - это аутоантитела анти-IgG (к Fc-фрагменту IgG) , относящиеся к классу IgM. В сыворотке ревматоидный фактор обычно присутствует в виде комплекса с IgG. В высоком титре ревматоидный фактор выявляется в крови у 80% больных с тяжелым прогрессирующим ревматоидным артритом .

• 
  Слайд 35

  Реакция коагглютинации (РКА)

  В качестве носителя используются: Белок АS.aureus(неспецифически адсорбирует на своей поверхности Fc-фрагменты иммуноглобулина G) Белок G стрептококков Инертные носители (активированный уголь)

• 
  Слайд 36

  Схема реакции коагглютинации

• 
  Слайд 37

  Реакция Кумбса с неполными антителами(бруцеллез, резус-конфликт)

  Антиглобулиновая сыворотка

• 
  Слайд 38

  Занятие №2

• 
  Слайд 39

  Реакция преципитации

  Осаждение специфических мелкодисперсных антигенов эквивалентным количеством антител (в присутствии электролита) Варианты: в жидкой среде - по типу реакции флокуляции, кольцепреципитации в плотной среде в агаре (геле).

• 
  Слайд 40

  Реакции преципитации:

  кольцепреципитации реакция флокуляции реакция преципитации в геле по Оухтерлони, радиальная иммунодиффузия по Манчини, реакция иммуноэлектрофореза

• 
  Слайд 41

  Реакция кольцепреципитации.

• 
  Слайд 42

  Реакция преципитации в растворе

  Реакция кольцепреципитации Реакция преципитации в капиллярных пробирках (флокуляция)

• 
  Слайд 43

  Реакция преципитации в геле по Оухтерлони

• 
  Слайд 44

  Реакция преципитации в геле по Манчини

• 
  Слайд 45

  Реакция иммуноэлектрофореза .

  Прибор иммуноэлектрофоретический ПИЭФ-1 (вирусный гепатит, клещевой энцефалит, менингококковая инфекция и др.).

• 
  Слайд 46

  Реакция иммунного лизиса:Реакция связывания комплемента (РСК)

  Реакция Борде— Жангу [по имени бактериологов Ж. Борде (J. Bordet) и О. Жангу (О. Gengou), 1901], высокоспецифичная и очень чувствительная серологическая реакция, основанная на свойстве комплекса антиген — антитело фиксировать свободный комплемент, применяемая при диагностике многих бактериальных и вирусных и некоторых протозойных и гельминтозных болезней, а также для изучения процессов, сопровождающихся изменением количества антигена или антител.

• 
  Слайд 47
  

  РСК протекает в 2 фазы: Взаимодействие АТ, АГ и комплемента, в результате которого свободный комплемент связывается образовавшимся комплексом АГ—АТ (специфич. фаза); индикация реакции сенсибилизир. эритроцитами (неспецифич. фаза). В РСК используют 2 системы: специфич. бактериол., состоящую из АТ (испытуемой сыворотки), АГ и комплемента, а также неспецифич. “индикаторную”, содержащую гемолизин (гемолитич. сыворотка) и взвесь эритроцитов барана. АГ соединяется с АТ только в присутствии комплемента. Если испытуемая сыворотка содержит АТ, гомологичные взятому АГ, то присутствующий в реагирующей смеси комплемент адсорбируется образующимся комплексом АГ—АТ и теряет способность лизировать сенсибилизированные эритроциты, т. е. без комплемента гемолизин (гемолитич. антитело) не разрушает эритроциты (реакция положительная). В тех случаях, когда между АГ и АТ испытуемой сыворотки нет специфич. родства, комплекс не образуется и комплемент остаётся в свободном состоянии. При добавлении гемолитич. системы в этом случае несвязанный комплемент вызывает гемолиз сенсибилизированных эритроцитов (реакция отрицательная).

• 
  Слайд 48

  Реакция связывания комплемента

  Реакция положительная Реакция отрицательная

• 
  Слайд 49
  

  Реакция Вассермана (RW) относится к группе реакций связывания комплемента(А. Р. Wassermann, нем. бактериолог, 1866-1925) - иммунологическая реакция, применяемая в диагностике сифилиса)

  Результаты реакции Вассермана: а - полная задержка гемолиза (+ + ++); б - выраженная задержка гемолиза (+ ++); в - частичная задержка гемолиза (++); г - слабая задержка гемолиза (+); д - полный гемолиз «лаковая кровь» (-). Реакция положительна при частичной, выраженной и полной задержке гемолиза, определяемой по степени окрашивания содержимого пробирок от светло-розового до ярко-красного. Негемолизированные эритроциты впоследствии образуют осадок красного цвета.

• 
  Слайд 50

  Иммунофлюоресцентный метод Кунса

• 
  Слайд 51
  

  Иммунофлюоресцентный анализ(метод Кунса)- или реакция иммунофлюорисценции(РИФ):

  Прямой флюорисцирующие АТ+ исследуемый АГ Непрямой – универсальная флюорисцирующая сыворотка + специфические АТ +исследуемый АГ Светящийся комплекс Светящийся комплекс

• 
  Слайд 52

  Иммунофлюоресцентный анализ

• 
  Слайд 53
  
• 
  Слайд 54

  Радиоиммунный анализ (РИА)твердофазный.

  Высоко чувствительный метод. Применяют для количественного определения различных веществ : гормонов, белков сыворотки крови, лекарственных препаратов, микробных антигенов. Изотоп – 125I. АТ АТ АТ АГ АГ АГ + АГ* АГ* АГ* АТ АТ АТ АГ АГ АГ АГ* АГ* АГ* АГ* АГ* АГ* АТ АТ АТ АГ АГ АГ Меченный радионуклеотидом АГ АГ АТ АГ* антиген антитело Твердая фаза

• 
  Слайд 55

  Иммуноферментный анализ (ИФА)

  Содержание набора (Сифилис ИФА 96) Промывающий раствор Субстрат Положительныйиотрицательныйконтроли Стоп-раствор Буфер для разведенияконьюгата Коньюгат Стрипированныймикропланшет

• 
  Слайд 56

  Схема иммуноферментного анализатвердофазный вариант

  Определение антител в сыворотке больного с сорбированным антигеном

• 
  Слайд 57

  Схема иммуноферментного анализа твердофазный вариант

  Определение антигена в сыворотке больного с сорбированными диагностическими антителами

• 
  Слайд 58

  Конкурентный вариант ИФА для определения антигенов

• 
  Слайд 59

  Иммунологические планшеты, используемые для постановки ИФА

• 
  Слайд 60

  Автоматический биохимический и иммуноферментный анализатор

• 
  Слайд 61