Презентация на тему "Жидкостная цитология в оптимизации цитологической диагностики"

Содержание

• 
  Слайд 1
  

  Шабалова И.П. Кафедра клинической лабораторной диагностики Российской медицинской академии последипломного образования . Жидкостная цитология в оптимизации цитологической диагностики

• 
  Слайд 2
  

  В настоящее время увеличивается актуальность морфологических исследований в связи с возможностью уточнить характер заболевания и интерпретировать данные, полученные с помощью других методов

• 
  Слайд 3
  
• 
  Слайд 4
  

  Цитологическое исследование- признанный метод морфологической диагностики Цитологический диагноз является равноценным гистологическому основанием к выбору метода лечения Точность цитологической диагностики приближается к результатам гистологического исследования или превосходит их

• 
  Слайд 5
  

  Материал не получен Клетки «пропущены» при осмотре Проблемы интерпретации Недостаточный опыт цитолога Объективные сложности Редкие опухоли и опухолеподобные поражения Опухоли, уточнение гистологической формы которых требует дополнительных методов диагностики Сложные в диагностическом отношении поражения Пограничные состояния Неопухолевые поражения, морфологические сходные с опухолями Прочие Инфекционные поражения, при которых необходимы дополнительные методы исследования Ограничения цитологической диагностики

• 
  Слайд 6
  

  Жидкостная цитология – метод, основанный на стандартизации технологии приготовления цитологических препаратов из жидкой клеточной суспензии

• 
  Слайд 7
  

  Впервые цитоцентрифуга как аппарат, от принципа работы которого отталкиваются современные модели, описана Watson в 1966 году

• 
  Слайд 8
  

  С помощью ЖЦ можно обрабатывать жидкости, содержащие клетки (спинномозговая, синовиальная, выпотные жидкости, моча, смывы физиологическим раствором, в том числе БАЛ (бронхоальвелярный лаваж) и др.

• 
  Слайд 9
  
• 
  Слайд 10

  Преимущества метода

  Быстрое приготовление препарата (клеточный материал распределяется непосредственно на стекле) Стандартный тонкослойный препарат Можно использовать любой метод окрашивания Быстрый и удобный просмотр: препарат однослойный, занимает небольшую площадь (6 - 10 мм в диаметре) Благодаря «закрытой» системе снижен риск инфицирования персонала, который приготавливает препараты

• 
  Слайд 11

  жидкости (выпот, моча, спинномозговая, содержимое кист), мокрота

• 
  Слайд 12

  Цитоцентрифуга Cellspin II

  Метод жидкостной цитологииПриготовление тонкослойных цитологических препаратов

• 
  Слайд 13
  

  цитоцентрифуга - ROTOFIX 32 Метод жидкостной цитологииПриготовление тонкослойных цитологических препаратов

• 
  Слайд 14
  

  Метод жидкостной цитологииПриготовление тонкослойных цитологических препаратов

• 
  Слайд 15

  Эксфолиативный, пункционный, биопсийный материал

  помещается в специальный стабилизирующий раствор транспортная среда «консервирует» собранный клеточный материал, создает оптимальные условия доставки собранных клеток в лабораторию

• 
  Слайд 16
  

  Микропробирки Метод жидкостной цитологии при исследовании пунктатов, эндоскопического материала

• 
  Слайд 17
  

  В зависимости от характеристик среды его можно хранить в течение нескольких месяцев и использовать для повторного приготовления препаратов (в том числе для иммуноцитохимического исследования), при необходимости применения молекулярно-генетических методов. Возможно приготовление из суспензии клеточных блоков.

• 
  Слайд 18

  Жидкостная цитология

  Ручной способ – Цитоцентрифугирование Полуавтоматический способ – обогащение клетокна градиенте плотности Автоматический способ – цитологический процессор

• 
  Слайд 19

  Метод жидкостной цитологии в гинекологии

  стандартизации технологии приготовления цитологических препаратов

• 
  Слайд 20
  
• 
  Слайд 21

  Материал

  4745 женщин от 15 до 77 лет (32±9,55 года) 8 (0,17%)- неинформативный материал 1060 наблюдений с результатами ВПЧ-тестирования и наличием референтного гистологического диагноза

• 
  Слайд 22

  Плоскоклеточные поражения выявлены

  при традиционном исследовании - у 35 (19,3%)пациенток При жидкостной цитологии – у76 (41,5%) При прицельной биопсии у101 (55,1%)

• 
  Слайд 23

  Преимущества метода жидкостной цитологии:

  В контейнер попадает весь материал, взятый щеточкой Из одного контейнера можно приготовить несколько препаратов Тонкослойные препараты удобны для микроскопии Клетки сохраняют морфологические, молекулярно-биологические свойства можно уточнить характер поражения без повторного гинекологического обследования (любое молекулярно-биологическое исследование) Длительный срок хранения исследуемого материала

• 
  Слайд 24
  

  Особенности метода жидкостной цитологии Препарат представляет собой «усредненный» клеточный состав Желательно окрашивать препараты по Папаниколау или гематоксилин-эозином При окрашивании методом Романовского (Паппенгейма, Лейшмана и др.) плохо видна структура ядра

• 
  Слайд 25

  Метод жидкостной цитологии в гинекологической практике

  Щеточка для взятия материала – CYTOPREP, стабилизирующий раствор CYTO-screen Приготовление тонкослойных цитологических препаратов Возможность автоматизации приготовления препаратов Возможность автоматизации скрининга Возможность использования дополнительных молекулярных исследований Контейнер NOVAPREP® Щеточка CERVEX BRUSH

• 
  Слайд 26

  Автоматизированные системы

  Автоматизированные системы для ЖЦ берут на себя большую часть однообразной работы. Впервые автоматизированные технологии приготовления цитологических препаратов с использованием жидкостной системы предложены в 1998 году в США (ThinPrep, AutoCyte Prep)

• 
  Слайд 27

  Жидкостная цитология

  Ручной способ – Цитоцентрифугирование Полуавтоматический способ – обогащение клетокна градиенте плотности Автоматический способ – цитологический процессор

• 
  Слайд 28
  

  PrepMate TriPath SurePath (BD)

• 
  Слайд 29
  

  PrepStain аппараты

• 
  Слайд 30
  
• 
  Слайд 31
  
• 
  Слайд 32
  
• 
  Слайд 33
  
• 
  Слайд 34
  
• 
  Слайд 35

  Жидкостная цитология

  Ручной способ – Цитоцентрифугирование Полуавтоматический способ – обогащение клетокна градиенте плотности Автоматический способ – цитологический процессор

• 
  Слайд 36
  

  Аппарат для автоматизированной жидкостной цитологической диагностики NOVAPREP®“NPS”

• 
  Слайд 37
  

  Двойное обогащение клеточного состава

• 
  Слайд 38
  
• 
  Слайд 39
  
• 
  Слайд 40
  

  Существуют системы, выполняющие и часть рутинной работы, связанной с просмотром препаратов. Цитотехнику или врачу-цитологу остается только просмотреть выделенные клетки, которые компьютер идентифицировал как отличающиеся от нормы, оценить их и установить диагноз.

• 
  Слайд 41
  

  8 препаратов в кассете До 36 кассет одновременно (288 стекол) FocalPoint Автоматизированный просмотр препаратов

• 
  Слайд 42
  

  FocalPoint Slide Scoring 75% Cytotechnologist review 25% No Further Review FocalPoint abnormality ranking High risk of abnormality Low risk of abnormality 5th 4th 3rd 2nd 1st quintile QC

• 
  Слайд 43
  
• 
  Слайд 44
  
• 
  Слайд 45

  Просмотр препаратов

  Просмотр препарата под микроскопом При нажатии специальной педали или стрелки –автоматический перевод на следующую отмеченную точку(10х) При необходимости –традиционный просмотр с любым увеличением

• 
  Слайд 46

  Автоматизированный просмотр препаратов

  Поиск патологических изменений При их отсутствии – заключение о норме При их наличии – трактовка обнаруженных изменений

• 
  Слайд 47
  

  Работа цитотехников из рутинной утомительной работы способна превратиться в творческий процесс – ИСКУССТВО интерпретации

• 
  Слайд 48
  
• 
  Слайд 49
  
• 
  Слайд 50

  Жидкостная цитология и молекулярные исследования

  Иммуноцитохимическое исследование Проточная цитометрия Гибридизация in situ на цитологическом материале ISH FISH CISH SISH Генетический анализ на цитологическом материале Мутации PCR секвенирование Экспрессия мРНК RT-PCR qRT-PCR

• 
  Слайд 51
  

  Геномика (ДНК – около 25 000 генов) Функциональная геномика (транскриптомика) (мРНК 100.000 мРНК) Протеомика (100.000.000 белков) Метаболомика (2500 молекул) Практически здоровый человек

• 
  Слайд 52
  

  Есть изменения в клетках – установить причину и характер Есть данные о патологическом процессе, полученные другими методами – определить, есть ли изменения в клетках

• 
  Слайд 53
  

  Белки: Экспрессия, гиперэкспрессия Гены: Амплификация Делеция Транслокация Мутация, в том числе SNP (single nucleotide polymorphism), точечная мутация Установление диагноза рака Подтверждение диагноза Прогноз Лечение

• 
  Слайд 54
  

  поломки в генетическом аппарате клеток на клеточном материале, нанесенном на «микрочипы» Микрочипы, биочипы

• 
  Слайд 55

  Микрочипы

  Генетические поломки Белки Антигены Рецепторы

• 
  Слайд 56

  ПЦР, RT-PCR, Hybrid Capture, NASBA и др.

  Возможны ложноположительные и ложноотрицательные результаты И ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО И МОЛЕКУЛЯРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

• 
  Слайд 57

  Молекулярные исследования при заболеваниях шейки матки

  Совместное применение цитологического метода и тестов на ДНК ВПЧ значительно снижает риск «проскальзывания» больных через «сеть» цитологического скрининга.

• 
  Слайд 58
  

  Диагностика и прогнозразвития интраэпителиальной неоплазии p16, p53 Метилирование ДНК Гены DAPK, HIN1, MGMT, RAR-β, RASSF1A, SHP1 –увеличение с увеличением степени дисплазии MGMT, RAR-β,Twist – увеличение частоты метилирования при HSIL-Cr

• 
  Слайд 59
  

  Результаты тестов: р16 и ВПЧ при проблемах интерпретации (ASC-US/ASC-H)

  В 11 из 17 наблюдений с ASC-US/ ASC-H отмечена экспрессия р16, причем в 10 из них гистологически выявлены HSIL+

• 
  Слайд 60
  
• 
  Слайд 61
  

  ЖЦ признана наиболее информативным методом скрининга заболеваний ШМ, рекомендованным ВОЗ в качестве «золотого стандарта» для исследований цервикальных мазков ЖЦ используется в скрининговых программах в некоторых странах и регионах Европы (в частности Великобритании), США, Австралии

• 
  Слайд 62
  

  Иммуноцитохимическое исследование Суспензия из биоптата желудка (РЭА) Аденокарцинома

• 
  Слайд 63
  

  Иммуноцитохимическое исследование Суспензия из биоптата желудка. HER2-New (CERb) Аденокарцинома

• 
  Слайд 64
  
• 
  Слайд 65
  

  Мезотелиома? Аденокарцинома? иммуноцитохимические маркеры В качестве маркеров мезотелиомы D2-40 (чувств. –92%, специф. – 93%), WT-1(чувств. – 96%, специф. – 84%) Калретинин (чувств. –100%, специф.– 85%) Мезотелин СК5/6 В качестве маркеров аденокарциномы CEA, BerEP4, МОС31, TTF-1, Napsin A

• 
  Слайд 66
  

  В нашей стране ЖЦ появилась сравнительно недавно, однако она уже апробирована в некоторых лечебно-диагностических учреждениях. Результаты масштабных исследований новой технологии за рубежом, а также исследования в нашей стране позволяют с уверенностью констатировать, что ЖЦ – это несомненно, большое достижение для практической медицины.

• 
  Слайд 67
  

  Медицина «4 P» Personalized – Персонализированная, (индивидуализированная) Prophylactic – Профилактическая, предупредительная Participated – С участием пациента, которого обучают, о котором заботятся Predictive – Предсказательная Leroy Hood, США, 2008 Терапия Адресная, целевая (Targeted) XXI век

• 
  Слайд 68
  

  Знания Умения Навыки Цитолог «созревает» долго Для полноценной диагностики врач должен не менее трех лет заниматься исследованием цитологических препаратов под руководством опытного специалиста, консультируясь с ним во всех сложных случаях Призвание

• 
  Слайд 69

  ВОЗМОЖНОСТИ ОРГАНИЗАЦИИ РАБОТЫ ЦИТОЛОГА:

  ЦЕНТРАЛИЗОВАННАЯ ЦИТОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ ЦИТОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯВ ОНКОЛОГИЧЕСКОМДИСПАНСЕРЕ И НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОМ ИНСТИТУТЕ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ ОТДЕЛ ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ АНАТОМИИ

• 
  Слайд 70
  
• 
  Слайд 71
  

  Развитие огромного числа новых дополнительных методов приводит к тому, что клиническая цитология становится одной из крупнейших диагностических специальностей М.Bibbo, Acta Cytol, 51, 2007

• 
  Слайд 72

  Сканирование всего препарата

• 
  Слайд 73
  

  Возможный алгоритм использования жидкостной цитологии в клинической практике Диагностика или скрининг (эксфолиативный материал, эндоскопический, пунктаты, жидкости)

  После получения материала готовятся традиционные мазки После получения материала весь материал помещается в жидкую среду Остальной материал помещается в жидкую среду (контейнеры, пробирки, микропробирки) Из клеточной суспензии готовятся однослойные препараты При цитологическом исследовании выявлены патологические изменения и необходимо уточнить диагноз Однослойные мазки, дополнительные методы окрашивания, дополнительные методы диагностики, в том числе молекулярно- биологические

• 
  Слайд 74

  ЖЦ и персонализированная медицина

  Клинические данные Данные УЗИ, рентгенологические, эндоскопические и др. Жидкостная цитология

• 
  Слайд 75
  
• 
  Слайд 76
  

  Гистология Клеточные блоки Цитология Гематология Общеклинические иссл. Биохимия Онкомаркеры Иммуноморфология Другие молекулярные исследования Генетика Микробиология Вирусология При необходимости расширение спектра исследований и/или коллегиальное решение

• 
  Слайд 77
  

  Гистология Клеточные блоки Цитология Гематология Общеклинические иссл. Биохимия Онкомаркеры Иммуноморфология Другие молекулярные исследования Генетика Микробиология Вирусология При необходимости коллегиальное решение с учетом и анализом полученных данных

• 
  Слайд 78
  

  Гистология Клеточные блоки Цитология Гематология Общеклинические иссл. Биохимия Онкомаркеры Иммуноморфология Другие молекулярные исследования Генетика Микробиология Вирусология При необходимости коллегиальное решение

• 
  Слайд 79
  

  Врачебное мастерство! Искусство врачевания! Предотвращение заболевания! Выявление заболевания на возможно более ранней стадии! Помощь больному человеку!