Презентация на тему "Биотехнологические методы получения иммуноглобулинов и применение их в научных исследованиях и медицине."

Содержание

• 
  Слайд 1
  

  • Биотехнологические методы получения иммуноглобулинов и применение их в научных исследованиях и медицине.
• 
  Слайд 2

  Гибридомная технология

  • Методика получения лимфоидных гибридом, позволяющая получать моноклональные антитела практически на любой антиген в необходимых количествах.
  • Технология лимфоидных гибридом была разработана в 1975 году Мильштейном и Келлером
  • 1984 году Келлер и Мильштейн были удостоены Нобелевской премии.
• 
  Слайд 3
  

  Гибридомная технология строилась на основе следующих разработок:

  • 1) имелись линии миеломных клеток мышей balb/c (дефектные по некоторым ферментам метаболизма нуклеиновых кислот)
  • 2) Линии этих раковых клеток-носителей, имели дефект гена кодирующий одтн из ферментов (тимидинкиназе (ТК) или гипоксантингуанинфосфорибозилтрансферазе (ГГФРТ))
  • 3) Технология слияния клеток с помощью вирусов (вирус Сендай) и полиэтиленгликоля
• 
  Слайд 4
  
• 
  Слайд 5
  
• 
  Слайд 6

  Конструирование комбинаторной библиотеки

  • Collect RNA
  • Convert RNA to DNA
  • PCR amplify antibody genes
  • Heavy Chain
  • Genes
  • Light Chain
  • genes
  • Натуральные библиотеки антител
  • - наивные библиотеки (naïve library)
  • - иммунные библиотеки (immune library)
  • Фаговый дисплей.
• 
  Слайд 7

  Конструирование комбинаторных библиотек

  Фаговый дисплей

  • E.coli TG1
  • E.coli TG1
  • E.coli TG1
  • E.coli TG1
  • E.coli TG1
  • pHEN2
  • Ori M13
  • Apr
  • PlacZ
  • RBS
  • ColE1
  • pIII
  • Vh
  • Vl
  • His
  • Линкер
  • Ser(Gly4Ser)2AlaArgGlySerGly4Ser
• 
  Слайд 8

  Фаговый дисплей

  • Фаг M13
• 
  Слайд 9
  

  Получение индивидуальных одноцепочечных антител

  • VhVl pIII
  • TAG
  • Vh
  • Vl

  Несупрессорные штаммы E.coli:

  • TAG
  • Gln

  Одноцепочечное антитело ковалентно связано с белком рIII фаговой частицы amber

  • Vh VlpIII
  • Vh
  • Vl
  • аминокислота
  • стоп-кодон
  • C-myc
  • 6×His
  • C-myc
  • 6×His
• 
  Слайд 10
  

  • Фагмида
  • Фаг-помощник
  • Геном фага
  • Инфицирование E.coli фагом-помощником
• 
  Слайд 11
  

  • Следующий раунд
  • Элюция
  • V V V V V
  • V V V V V
  • Аффинная селекция (биопеннинг)
  • Амплификация
  • в E.coli
  • антиген
  • антиген
• 
  Слайд 12
  

  • Ренатурирование in vitro
  • Функциональное
  • scFv
  • Агрегировавшие АТ
  • Частичный лизис внешней мембраны
  • Функциональное
  • scFv
  • Плазмида
  • Цит. тельце включения
  • Секреция
  • Продукция антиген-связывающих фрагментов антител в E.coli