Презентация на тему "Молекулярно-генетические исследования"

Содержание

• 
  Слайд 1

  Молекулярно-генетические исследования

  Выполнила: Галымжан Арна 7/103гр. Проверила: Жумагали О.М.

• 
  Слайд 2
  

  Молекулярная основа экспрессии гена. Вся наследственная информация пе­редается от родителей к детям посредством наследования дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). ДНК—это линейный полимер, состоящий из пуриновых и пиримидиновых оснований, последовательность которых полностью предопределяет последовательность аминокислот любого белка, синтезируемого организмом. Четыре типа оснований ДНК организованы в группы по три; каждый триплет образует кодовое слово, или кодон, которое кодирует конкретную аминокислоту.

• 
  Слайд 3

  Классификациянаследственных болезней

  1. Генные болезни - обусловлены генными мутациями. 2. Хромосомные болезни - обусловленные хромосомными и геномными мутвциямы. 3. Мультифакториальные болезни (с наследственной предрасположенностью) обусловлены комбинацией генетических и негенетические факторов. 4. Болезни генетической несовместимости матери и плода (иммунологические реакции матери на антиген плода) Различают: моногенные - обусловлены действием одного гена; и полигенные болезни - действием нескольких генов.

• 
  Слайд 4

  Генныемутации

  Генные мутации - изменение структуры ДНК гена Генные (молекулярные) болезни - это наследственные болезни, которые возникают вследствие генных мутаций. Виды генных мутаций: замены, вставки, выпадения, удвоение пар нуклеотидов. В результате нарушается строение белков

• 
  Слайд 5
  
• 
  Слайд 6
  
• 
  Слайд 7
  
• 
  Слайд 8
  
• 
  Слайд 9
  
• 
  Слайд 10
  
• 
  Слайд 11
  
• 
  Слайд 12
  

  Синдром Паскуалини или изолированный дефицит лютропина. Это врожденное заболевание, характеризующееся недостаточной выработкой лютеотропного гормона гипофиза, в результате чего недостаточно производится тестостерона в яичках и возникает недостаточность мужских половых желез (гипогонадизм). Это сопровождается снижением подвижности сперматозоидов, уменьшением объема спермы, нарушением биохимического состава спермы, нежизнеспособностью сперматозоидов. Рост пациентов высокий, пропорции тела евнухоидные, недоразвиты яички и половой член, оволосение на теле скудное. Бесплодие наблюдается в большинстве случаев. Диагноз  при синдроме Паскуалини устанавливается по характерному внешнему виду больных, нарушениям половой функции, снижению в крови количества лютропина, тестостерона, при нормальном содержании фоллитропина. Генетическое исследование не выявляет отклонений от нормы.

• 
  Слайд 13

  ДНК - диагностика

  Изучает непосредственную причину заболевания Наиболее адекватная и точная диагностика Возможна даже в тех случаях, когда неизвестен ген, ответственный за заболевание

• 
  Слайд 14
  

  Типы ДНК- диагностики ПРЯМАЯ Определение мутации, являющейся непосредственной причиной болезни КОСВЕННАЯ Определение хромосомы, несущей поврежденный ген при семейном анализе

• 
  Слайд 15

  Методы прямой ДНК-диагностики:

  Количественная флюоресцентная ПЦР. Real-time ПЦР. Анализ кривой плавления MLPA – анализ (количественная лигазная реакция) Ресеквенирование

• 
  Слайд 16

  ПЦР

  ПЦР лежит в основе ДНК-диагностики любых наследственных заболеваний. С помощью ПЦР можно непосредственно исследовать места локализации предполагаемых мутаций или полиморфных сайтов, а также изучать наличие любых других специфических особенностей ДНК.

• 
  Слайд 17
  
• 
  Слайд 18

  Схема удвоения фрагментов ДНК в ПЦР (AndyVierstraete, 2001)

• 
  Слайд 19
  
• 
  Слайд 20

  Количественная флуоресцентная ПЦР (QF PCR)

  Анализ дозы гена Анализ экспрессии генов Метод флуоресцентной количественной полимеразной цепной реакции (quantitativeFluorescent PCR – QF-PCR) заключается в амплификации коротких тандемных повторов ДНК (STR), расположенных на исследуемой хромосоме или сцепленных с исследуемым геном. Использование в ПЦР специальной флуоресцентной метки позволяет идентифицировать количество аллелей STR-маркеров при разделении на капиллярном электрофорезе и точно определять дозу каждого фрагмента ДНК гена или хромосомы, для этого в реакционную смесь добавляют специфический флюоресцентный зонд и далее через 30-40 циклов определяют уровень флюоресценции. Интерпретация результатов проводится с учетом количества пиков на электрофореграмме и их относительной высоты.

• 
  Слайд 21

  Real-time ПЦР

  Анализ дозы гена (делеции/дупликации) Определение точковых замен Анализ экспрессии генов - онкологические исследования - трисомии - анализ плодного материала по кровотоку матери - генотерапия

• 
  Слайд 22

  Анализ кривой плавления

  Позволяет провести оценку качества реакции, поскольку увеличение флюорисценции может быть связано как с накоплением специфического продукта, так и неспецифического (праймеры-димеры, шмер). Для этого после окончания ПЦР реакционную смесь нагревают и непрерывно измеряют флюоресценцию. По достижении температуры плавления продукта амплификации флюоресценция резко снижается. Температура плавления зависит от нуклеотидного состава, поэтому путем сравнения кривых плавления изучаемых образцов с таковыми в образцах, имеющих известную последовательность, можно выявить кандидатов на дальнейшее секвенирование.

• 
  Слайд 23
  

  Стрелкой показана кривая плавления образца с мутацией; С – мутация TSC1c.1525C>T; D – нормальная нуклеотидная последовательность TSC1

• 
  Слайд 24

  MLPA – анализ (мультиплексная амплификация лигазно-связаных проб)

  Определение числа копий фрагмента (дозы гена) - Носительство Х-сцепленныхделеций для женщин - Аутосомныеделеции/дупликации - Микроделеционные синдромы - Анеуплоидии - Определение числа копий гена/псевдогена Анализ однонуклеотидных замен (SNP)

• 
  Слайд 25
  
• 
  Слайд 26

  Ресеквенирование

  - Повторное секвенирование генома с целью выявления разнообразных структурных вариаций (однонуклеотидных полиморфизмов, или «снипов», а также инсерций, делеций, повторов, инверсий, транслокаций). В отличие от секвенирования неизвестных последовательностей de novo, при котором прочтения соотносятся друг с другом и собираются в контиги, для ре-секвенирования достаточно просто «картировать» прочтения на референсную последовательность, уже имеющуюся под рукой. Снипы выглядят как однонуклеотидные замены в коротких прочтениях, при этом количество прочтений с заменой говорит о состоянии аллеля — гомозиготном (все прочтения с заменой) или гетерозиготном (половина прочтений с заменой).

• 
  Слайд 27
  
• 
  Слайд 28

  Цитогенетический метод

  Основным методом исследования хромосом человека после рождения является напивмикрометод, при котором анализируют лимфоциты периферической крови после предварительного культивирования. Культивирования происходит в специально предназначенном инкубаторе (37 ° С, 5% С02) в течение 50 или 69 часов (срок первого и второго митотических делений соответственно).

• 
  Слайд 29

  Генеалогический метод -

  метод составления и анализа родословных. Типи наследованиягенныхзаболеваний: 1) аутосомно-доминантный; 2) аутосомно-рецессивный; 3) Х-сцепленный доминантный; 4) Х-сцепленный рецессивный; 5) Y-сцепленный тип

• 
  Слайд 30
  
• 
  Слайд 31
  
• 
  Слайд 32

  Заключение

  Заключение, полученное с помощью ДНК-диагностики, дает оценку вероятности возникновения заболеваний, ассоциированных с теми или иными мутациями/полиморфизмами и профилактические и лечебно-диагностические рекомендации для пациента и лечащего врача.

• 
  Слайд 33

  Литературы

  Харрисон – Внутренние болезни Н. П. Бочков “Клиническая генетика”-2011 Сергеева Н.А. Базовый проект “Лаборатория ДНК – диагностики Школы биомедицины ДВФУ” Перевод с английского под редакцией проф. В.В. Фадеева “Диагностика и лечение в эндокринологии ”-2010

• 
  Слайд 34
  

  Спасибо за внимание!