Презентация на тему "Полимеразная цепная реакция"

Содержание

• 
  Слайд 1

  Полимеразная цепная реакция

  Выполнила студентка 5 курса 13 группы лечебного факультета Шипякова О.И. Преподаватель асс.кафедры Фролова Ольга Васильевна.

• 
  Слайд 2
  

  Полимера́знаяцепна́яреа́кция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе).

• 
  Слайд 3

  Компоненты реакции

  ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать. Два праймера, комплементарные противоположным концам разных цепей требуемого фрагмента ДНК. Термостабильная ДНК-полимераза — фермент, который катализирует реакцию полимеризации ДНК. Полимераза для использования в ПЦР должна сохранять активность при высокой температуре длительное время, поэтому используют ферменты, выделенные из термофилов — Thermus aquaticus (Taq-полимераза), Pyrococcus furiosus (Pfu-полимераза), Pyrococcus woesei (Pwo-полимераза) и другие. Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (dATP, dGTP, dCTP, dTTP). Ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы. Буферный раствор, обеспечивающий необходимые условия реакции — рН, ионную силу раствора. Содержит соли, бычий сывороточный альбумин.

• 
  Слайд 4

  Амплификатор

• 
  Слайд 5
  

  Схематическое изображение первого цикла ПЦР. (1) Денатурация при 94—96 °C. (2) Отжиг при 68 °C (например). (3) Элонгация при 72 °C (P=полимераза). (4) Закончен первый цикл. Две получившиеся ДНК-цепи служат матрицей для следующего цикла, поэтому количество матричной ДНК в ходе каждого цикла удваивается.

• 
  Слайд 6

  Разновидности ПЦР

  «Вложенная» ПЦР «Инвертированная» ПЦР с обратной транскрипцией Асимметричная Количественная ПЦР Количественная ПЦР в реальном времени Touchdown Метод молекулярных колоний ПЦР с быстрой амплификацией концов кДНК ПЦР длинных фрагментов RAPD PCR со случайной амплификацией полиморфной ДНК с использованием горячего старта

• 
  Слайд 7

  Применение

  Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонированиягенов, выделения новых генов. Ф

• 
  Слайд 8

  «генетические отпечатки пальцев»

• 
  Слайд 9

  Установление отцовства

• 
  Слайд 10

  Медицинская диагностика

• 
  Слайд 11

  Персонализированная медицина

  Предварительное генотипирование

• 
  Слайд 12

  Клонирование генов

  Клонирование гена с использованием плазмиды.(1) Хромосомная ДНК организма A. (2) ПЦР. (3) Множество копий гена организма А. (4) Вставка гена в плазмиду. (5) Плазмида с геном организма А. (6) Введение плазмиды в организм В. (7) Умножение количества копий гена организма А в организме В.

• 
  Слайд 13

  Секвенирование

  Участок геля, меченного радиоактивным изотопом

• 
  Слайд 14

  Мутагенез

  Cинтезируют пару праймеров, несущих мутацию, и пару праймеров, комплементарных концам нужного фрагмента ДНК. В ходе первых двух реакций образуются фрагменты ДНК с мутацией, которые объединяют в третьей реакции. Полученный фрагмент вставляют в нужную генно-инженерную конструкцию.

• 
  Слайд 15

  Список литературы

  Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с. Патрушев Л. И. Искусственные генетические системы. — М.: Наука, 2005. Щелкунов С. Н. Генетическая инженерия. — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. —

• 
  Слайд 16

  Благодарю за внимание.