Презентация на тему "Различные типы ФКУ и методы их молекулярной диагностики"

Содержание

• 
  Слайд 1

  Различные типы ФКУ и методы их молекулярной диагностики.

• 
  Слайд 2
  

  Фенилкетонурия –частое врожденное нарушение метаболизма аминокислот, в основе которого лежит дефицит печеночного фермента фенилаланингидроксилазы, осуществляющего превращение фенилаланина. Основным клиническим симптомом фенилкетонурии, без своевременного начатого лечения, является задержка психо-речевого и физического развития и, как следствие, слабоумие, ведущее к тяжелой психической инвалидности.

• 
  Слайд 3
  

  Распространенность ФКУ в различных популяциях мира, по данным массового скрининга Популяция Частота носителей Частота заболевания Авторы Турция 1:26 1:2600 Ozalp et al., 1986 Ирландия 1:33 1:4500 DiLella et al., 1986 Восточная Европа 1:50 1:10 000 Scriver & Kaufman, 2001 Япония 1:200 1:143 000 Aoki & Wada, 1988 Финляндия 1:225 1:200 000 Scriver & Kaufman, 2001

• 
  Слайд 4

  ФЕНИЛКЕТОНУРИЯ

  Классическая Повреждении в гене фенилаланингидроксилазы (PAH) 98% Атипичная Повреждения в генах синтеза и обмена тетрогидробиоптерина (ВН4) (PTS, QDPR и др.) 2%

• 
  Слайд 5
  
• 
  Слайд 6
  

  Частота встречаемости наиболее частых мутаций среди больных   в мире (http://data.mch.mcgill.ca/pahdb) в Европейских популяциях (ZschockeJ., 2003 ) 42% 63%

• 
  Слайд 7
  

  Система регистрации наиболее частых мутаций R252W R261Q Norm IVS12+1g>a Norm R408W 11ex Norm IVS10-11g>a 3ex Norm I65T P281L 7ex Norm R158Q 5ex Norm   1 2 3 А) одна пара праймеров и две эндонуклеазы рестрикции Б) две пары праймеров и одна эндонуклеаза рестрикции

• 
  Слайд 8

  Структура выборки (N=302)

• 
  Слайд 9

  Частота встречаемости наиболее частых мутаций в Российских популяциях

  79,1%

• 
  Слайд 10
  

  Частота распространения наиболее частых мутаций в мире, в Европейских популяциях и в исследуемых российских популяциях больных ФКУ

• 
  Слайд 11
  

  . Фрагмент сиквенса экзона 7 гена РАН, образца ДНК больного ФКУ из Воронежской области. Замена G на Т в 781 основании гена РАНприводящая к преждевременному стоп кодону в 261 кодоне (Arg261Stop). Стрелкой обозначена мутация R261X. SSCP-анализ экзона 7 гена PAH Стрелкой обозначеноизменение электрофоретической Подвижности соответствующее мутации R261X.

• 
  Слайд 12
  

  экзон 1 экзон 3 экзон 2 экзон 5 экзон 9 экзон 10 экзон 11 экзон 12 экзон 13 экзон 7 экзон 8 экзон 6 экзон 4 p.F39del L48S IVS2+5g>a IVS2-13t>g 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 IVS4+5g>t del 875-882nt A132V A165V R243X E256D R261X E280K IVS7+1g>a L348V S349P IVS10-14c>g E390D IVS11+1g>c R408Q Y414C I421N Структура гена PAH и локализация обнаруженных мутаций в гене PAH Суммарная информативность 87,2%

• 
  Слайд 13

  Полиморфные маркеры внутри и непосредственной близости от гена PAH

  1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 STR VNTR PAH 26 STR 76kb VNTR STR   PAH 26 STR Гетерозиготность 75% Гетерозиготность 72% Гетерозиготность 70%

• 
  Слайд 14

  Исследование в гене PAH

• 
  Слайд 15
  

  Синтез и метаболизм тетрагидробиоптерина PTPS DHPR PAH Гуанозинтрифосфат(GTP) Дигидроптеринтрифосфат 6-пировоилтетрагидроптерин Тетрагидробиоптерин q-Дигидроптерин 4а-карбиноламин Фенилаланин Тирозин Тирозин Дофамин Триптофан 5-ОН-Триптофан Серотонин Птерин-

• 
  Слайд 16
  

  ГенQDPRлокализован на хромосоме 4 в районе p15.3 Ген PTS расположен хромосоме 11 в районе q22.3-23.3 PTS GCH1 PCBD QDPR

• 
  Слайд 17
  

  AGT TAG 2,7kb 1,9kb 10kb 2,5kb 1,7kb экзон 1 экзон 2 экзон 3 экзон 4 экзон 5 экзон 6 A135D экзон 7 2,7kb Структура гена QDPR и локализация обнаруженных мутаций в гене QDPR

• 
  Слайд 18

  Структура и локализация обнаруженных мутаций в гене PTS

  2,0kb 1,5kb 0,4kb 2,5kb 0,2kb экзон 1 экзон 2 экзон 3 экзон 4 экзон 5 экзон 6 AGT TAG N72K V59G S32G IVS5-1g>a T106M g.7068G>A

• 
  Слайд 19
  
• 
  Слайд 20
  

  Больной ВН4-зависимой формой ГФА Диета с пониженным содержанием ФА Умственная отсталость и тяжелые неврологические нарушения Комбинированное лечение диета с пониженным содержанием ФА медиаторы ВН4 Отсутствие неврологической симптоматики

• 
  Слайд 21

  Практическое применение

  С помощью разработанной системы регистрации наиболее частых мутаций в гене PAH проведено: 216 диагностики гетерозиготного носительства мутаций в гене PAH: 162 диагностики провели для индивидов, не имеющих в семье больного ФКУ (планирование беременности):обнаружено 4 гетерозиготных носителя мутаций в гене PAH 54 диагностики в семьях больных ФКУ: обнаружено 26 гетерозиготных носителя мутаций в гене PAH 67 пренатальных диагностик, из них: В семи случаях плод унаследовал те же хромосомы, что и больной ребенок В 46 случае плод являлся гетерозиготным носителем заболевания    В 14 случаях плод не унаследовал мутации в гене PAH

• 
  Слайд 22
  

  Диагностика недостаточности тетрагидробиоптерина: Подтвержден диагноз «BH4 – зависимая форма ГФА», найдены мутации в гене PTS Методом SSCP-анализа с последующим секвенированием проведена Практическое применение

• 
  Слайд 23
  

  Повышенный уровень ФА, клинические проявления ГФА Молекулярно-генетическое исследование гена PAH с помощью системы обнаружения наиболее частых мутаций Обнаружены обе мутации в гене PAH Обнаружена одна мутация в гене PAH Мутаций в гене PAH не обнаружено Косвенная диагностика с использованием полиморфных маркеров, расположенных внутри и непосредственной близости от гена PAH SSCP-анализ всей кодирующей последовательности гена PAH и областей интрон-экзонных соединений Обнаружены обе мутации в гене PAH Обнаружена одна мутация в гене PAH Мутаций не обнаружено SSCP-анализ всей кодирующей последовательности и областей интрон-экзонных соединений генов PTS и QDPR Семья информативна, возможно проведение пренатальной диагностики и выявление гетерозиготных носителей среди родственников Схема молекулярно-генетической диагностики гиперфенилаланинемии 69,2% 100%